[发明专利]一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒在审
| 申请号： | 201910991393.X | 申请日： | 2019-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN110724742A | 公开（公告）日： | 2020-01-24 |
| 发明（设计）人： | 梁国威;张洁 | 申请（专利权）人： | 航天中心医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 12217 天津市尚仪知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 邓琳 |
| 地址： | 100049*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变 临床常规 预混试剂 启动子 试剂盒 检测 突变位点检测 荧光定量PCR 检测灵敏度 野生型DNA 发明试剂 技术平台 人外周血 特异性强 突变质粒 准确定量 常规PCR 标准品 种检测 标本 | ||
1.一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：包括针对TERT基因启动子-124（C/T）和-146（C/T）突变位点检测的DNA富集常规PCR预混试剂、-124（C/T）和-146（C/T）突变质粒和人外周血野生型DNA标准品以及-124（C/T）和-146（C/T）突变率检测qPCR预混试剂。
2.根据权利要求1所述的一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：所述DNA富集常规PCR预混试剂包括引物，所述引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。
3.根据权利要求1或2所述的一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：所述-124（C/T）和-146（C/T）突变率检测qPCR预混试剂包括引物、指示探针和LNA抑制探针，TERT -146（C/T）突变率检测qPCR扩增反应的引物、指示探针和LNA抑制探针序列分别为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；TERT -124(C/T) 突变率检测qPCR扩增反应的引物、指示探针和LNA抑制探针序列分别为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQID NO.9和SEQ ID NO.6。
4.根据权利要求1所述的一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：DNA富集常规PCR反应的反应条件为98℃预变性3min；98℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，45个循环。
5.根据权利要求1所述的一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：TERT -146（C/T）和TERT -124（C/T）突变率检测，qPCR扩增反应条件为98℃预变性8min；98℃ 15s，58℃ 40s，50个循环。
6.根据权利要求1所述的一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：-124（C/T）和-146（C/T）突变质粒和人外周血野生型DNA标准品的制备方法为：以健康人外周血DNA标本和-124（C/T）和-146（C/T）突变质粒标本经DNA富集常规PCR扩增，产物纯化、测定浓度后，根据分子量换算成1011拷贝数/ml，以1011拷贝数/ml健康人来源DNA作为基质，加入校准后TERT -146（C/T）或TERT -124（C/T）突变的1011拷贝数/ml校准品，分别配制成100%、10%、1%、0.5%、0.1%、0.05%突变和100%野生的梯度突变率标准品。
7.根据权利要求1所述的一种检测人TERT基因启动子热点突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒适用于含有TERT -124（C/T）和-146（C/T）突变序列的组织、蜡块包埋组织、全血DNA、血浆游离DNA、体液标本或突变质粒的样品的检测。
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