[发明专利]定量检测氧化低密度脂蛋白的时间分辨免疫层析试剂盒及应用

权利要求书

1.一种定量检测氧化低密度脂蛋白的时间分辨免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括样本稀释液、测试卡和复制有人氧化低密度脂蛋白标准曲线信息的ID卡，其中所述测试卡由PVC板、样品垫、标记垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，所述标记垫上喷制有标记抗Ox-LDL抗体的Eu荧光微球。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上划有一条抗APOB单克隆抗体检测线和一条羊抗鼠多克隆抗体质控线。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述结合垫上包括Eu荧光微球标记的人氧化低密度脂蛋白抗体。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述Eu荧光微球为粒径为200～300nm，优选为200～250nm，最优选为210nm聚苯乙烯-羧基微球；

优选地，所述Eu荧光微球表面无修饰直链手臂、表面修饰6原子直链手臂、表面修饰200原子直链手臂、表面修饰1000原子直链手臂；

更优选地，所述Eu荧光微球表面修饰6原子直链手臂。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括0.05MpH 8.0的Tris-HCl缓冲液，0.5％的Proclin 300，0.2％BSA,0.2％(v/v)Tween-20，0.5％(w/v)brij-35，0.1(w/v)维生素C。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括校准品稀释液；

优选地，所述校准品稀释液包括0.02M pH 7.4的PBS缓冲液，0.5％(v/v)的Proclin300，3g/L BSA，0.5g/L乙二胺四乙酸二钠，1％人血白蛋白。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述标记抗Ox-LDL抗体的Eu荧光微球通过Eu-荧光微球与抗Ox-LDL抗体经活化、偶联、封闭制备得到；

优选地，所述方法包括以下步骤：

(A)Eu荧光微球活化：吸取Eu荧光微球到离心管中，加入硼酸缓冲溶液至浓度1～3mg/ml，振荡混匀；加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶液室温振荡活化；

(B)抗体与微球偶联：将步骤(A)中活化好的微球离心弃上清，用硼酸缓冲溶液复溶；加入抗Ox-LDL抗体抗体，至终浓度200～400g/ml室温振荡孵育；

(C)封闭：在步骤(B)所得抗体偶联混合液中，加入含有BSA的Tris-HCl封闭液2-8℃封闭；

(D)储存：封闭后的抗体荧光微球洗涤离心弃上清，加入微球保存液，放入2-8℃条件下保存；

更优选地，所述微球保存液包括0.05M pH 8.0的Tris-HCl缓冲液，含2％(w/v)BSA，3％(w/v)海藻糖，10％(w/v)蔗糖，0.2％(v/v)Tween-20，0.1％(v/v)Proclin 300。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)分别制备标记垫、结合垫、硝酸纤维素膜；

(2)将硝酸纤维素膜光面向下贴到PVC板中间位置，质控线在上，检测线在下；

(3)沿硝酸纤维素膜下缘粘贴结合垫，优选地，所述结合垫与硝酸纤维素膜重叠1～1.5mm；

(4)沿结合垫下边缘粘贴标记垫；优选地，所述结合垫与标记垫重叠1～1.5mm；

(5)沿标记垫下边缘贴样品垫，优选地，所述标记垫与结合垫边缘重叠1～1.5mm；和

(6)将吸水纸贴于PVC板上，优选地，所述吸水纸硝酸纤维素膜重叠2～3mm。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述结合垫的制备方法包括以下步骤：

用喷金缓冲液配制按照5～20倍、优选为10～20倍、最优选为15倍效价稀释标记微球后，将微球喷制到结合垫上。

10.权利要求1至7中任一项所述的试剂盒在制备用于检测氧化低密度脂蛋白的产品中的应用。