[发明专利]一种基于无序蛋白偶联酶的高效多肽-多肽偶联系统和方法

权利要求书

1.一种多肽-多肽偶联系统，是基于蛋白质结构域CnaB2进行蛋白质拆分并优化得到的，包括谍标签、BD标签和谍订书机酶，其中谍订书机酶能够催化谍标签和BD标签之间的偶联反应，所述谍标签、BD标签和谍订书机酶的氨基酸序列分别如序列表中SEQ ID No：1、SEQID No：2和SEQ ID No：3所示。

2.一种基于权利要求1所述的多肽-多肽偶联系统的蛋白质偶联或环化方法，包括：

1) 构建含有权利要求1中所述谍标签、BD标签和功能蛋白质结构域的融合蛋白质的基因序列，并将其引入表达载体中；

2) 将表达载体导入细胞，在细胞中表达所构建的基因对应的融合蛋白质；

3) 在细胞内同时表达权利要求1中所述的谍订书机酶，使融合蛋白质在胞内发生偶联或环化反应；或者，纯化表达的融合蛋白质，使所述谍订书机酶在胞外催化融合蛋白质发生偶联或环化反应。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述融合蛋白质包括一个或者多个相同或不同的功能蛋白质结构域，所述谍标签和BD标签位于融合蛋白质的N端、C端和/或蛋白质链段中。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1）中将谍标签和BD标签的基因分别或共同与功能蛋白质结构域的基因构建在一起。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述功能蛋白质结构域选自类弹性蛋白质、荧光蛋白质和二氢叶酸还原酶中的一种或多种。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白质在N端具有6×His标签，利用Ni亲和层析柱进行纯化。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述谍标签和BD标签的基因序列分别如序列表中 SEQ ID No：7和SEQ ID No：8所示。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤3）中，所述谍订书机酶与融合蛋白质在胞内共表达，或者，在所述谍订书机酶的N端添加6×His标签，单独进行表达和纯化。

9.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述谍订书机酶的基因如序列表中 SEQ IDNo：9所示。