[发明专利]一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法

权利要求书

1.一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备供试品溶液：精密称取甘氨酰-L-谷氨酰胺，用水稀释成每1ml水中含有甘氨酰-L-谷氨酰胺2.5-3.5mg的甘氨酰-L-谷氨酰胺溶液；

（2）制备混合对照品溶液：精密称取甘氨酰-L-谷氨酰胺对照品和甘氨酰-D-谷氨酰胺对照品，用水稀释成每1ml水中含有甘氨酰-L-谷氨酰胺2.5-3.5mg、甘氨酰-D-谷氨酰胺4-5µg的混合溶液；

（3）供试品溶液衍生：精密量取供试品溶液，置干燥的衍生管中，加入缓冲液，涡旋混合，加入衍生试剂，涡旋混合，样品管用石蜡膜封口，加热10min，取出衍生所得样品放冷至22-28℃，转移至微量进样管中；

（4）混合对照品溶液衍生：精密量取混合对照品溶液，与步骤（3）同法衍生操作；

（5）色谱：精密量取步骤（3）、步骤（4）衍生所得的样品各2µl，待手性色谱柱平衡好后，注入液相色谱仪，采集手性分离色谱图，记录色谱图，查看分离效果；

步骤（3）所述缓冲液为Waters AccQ•Fluor硼酸缓冲液Buffer1，来自于美国Waters公司提供的Waters AccQ•Fluor试剂盒；

所述衍生试剂由Waters AccQ•Fluor衍生剂粉末、Waters AccQ•Fluor衍生剂稀释剂制得，所述Waters AccQ•Fluor衍生剂粉末，Waters AccQ•Fluor衍生剂稀释剂来自于美国Waters公司提供的Waters AccQ•Fluor试剂盒；

步骤（5）所述色谱条件为：

1）色谱柱为用硅胶表面共价键合-奎宁定(8R,9S)-(1R,2R)-环己基氨基磺酸衍生物为填充剂，色谱柱为3µm，150×4mm色谱柱；

2）流动相为甲酸、二乙胺、甲醇的混合物，所述甲酸、二乙胺、甲醇的体积比为1.9:2.6:995.5；

3）检测波长为248nm；

4）流速为0.2-0.22ml/min；

5）柱温为20-22℃。

2.根据权利要求1所述的一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法，步骤（1）所述甘氨酰谷氨酰胺为甘氨酰-L-谷氨酰胺与甘氨酰-D-谷氨酰胺的混合物。

3.根据权利要求1所述的一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法，步骤（3）所述衍生管直径6mm，高50mm。

4.根据权利要求1所述的一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法，所述衍生试剂的制备方法包括以下步骤：由Waters AccQ•Fluor衍生剂稀释剂的2B瓶中吸取1mlWatersAccQ•Fluor衍生剂稀释剂至Waters AccQ•Fluor衍生剂粉末的2A瓶中，加盖密封，震荡10s，于55℃加热30min，使衍生剂粉末全部溶解，取出放冷至22-28℃，于干燥器内存放。

5.根据权利要求1所述的一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法，步骤（5）所述的手性色谱柱的平衡时间≥100min。