[发明专利]一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法

说明书

本发明公开了一种甘氨酰‑D‑谷氨酰胺的高效液相检测方法，包括以下步骤：制备供试品溶液；制备混合对照品溶液；供试品溶液衍生；混合对照品溶液衍生；色谱：精密量取步骤(3)、步骤(4)衍生所得的样品各2μl，待手性色谱柱平衡好后，注入液相色谱仪，采集手性分离色谱图，记录色谱图至60min，查看分离效果。本发明实现了甘氨酰‑L‑谷氨酰胺与甘氨酰‑D‑谷氨酰胺的手性分离问题，提高了测试效率，且手性柱稳定性比较好，分离多次仍能得到很好的分离效果，使用范围广，有很好的经济价值。

技术领域

本发明属于高效液相色谱检测技术领域，涉及一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法。

背景技术

氨基酸在人体中的存在，不仅提供了合成蛋白质的重要原料，而且对于促进生长，进行正常代谢、维持生命提供了物质基础。氨基酸类药物副作用低，药效高，针对性强，不会蓄积于体内而引起中毒。

甘氨酰-L-谷氨酰胺常被用于提供谷氨酰胺以促进蛋白质的合成，构成蛋白质的氨基酸都是L型氨基酸，而经由化学合成得到的药物往往是对映体，不是单一的光学异构体，在许多情况下，化合物的一对对映体在生物体内的药理活性、代谢过程、代谢速率及毒性等存在显著的差异，一般存在四种不同的情况：一对对映体中的两个化合物都有等同的或近乎等同的定性和定量的药理活性；只有一种对映体具有所要求的药理活性，而另一种对映体则没有显著的药理作用；各种对映体具有定量上不同的活性；两种对映体具有定量上等同，但定性上不同的活性。对于甘氨酰谷氨酰胺的一对对映体，甘氨酰-L-谷氨酰胺具有药理活性，而甘氨酰-D-谷氨酰胺则没有显著的药理作用。为了保证合成产物的光学纯度，严格控制合成过程中甘氨酰-D-谷氨酰胺的产生是一个十分重要的问题。

当研制具有不对称中心药物时，需要用到多种手性色谱柱和手性流动相来进行测试，其测试时间长，效果不理想。甘氨酰谷氨酰胺为末端吸收,紫外吸收不强，采用手性色谱柱进行分离测定甘氨酰谷氨酰胺的异构体不但成本高，而且分离难度大。现有技术中也已有其它紫外吸收较弱的产品采用衍生化试剂衍生化后通过普通色谱柱进行分离的报道，但是其方法需要的反应时间长，还需要溶剂干燥、复溶、过滤等步骤，操作步骤繁琐。

因此，研发一种快速、简单、经济、应用范围广的甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种快速、简单、经济、应用范围广的甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种甘氨酰-D-谷氨酰胺的高效液相检测方法，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：精密称取甘氨酰-L-谷氨酰胺，用水稀释成每1ml水中含有甘氨酰-L-谷氨酰胺2.5-3.5mg的甘氨酰-L-谷氨酰胺溶液；

(2)制备混合对照品溶液：精密称取甘氨酰-L-谷氨酰胺对照品和甘氨酰-D-谷氨酰胺对照品，用水稀释成1ml水中含有甘氨酰-L-谷氨酰胺2.5-3.5mg、甘氨酰-D-谷氨酰胺4-5μg的混合溶液；

(3)供试品溶液衍生：精密量取供试品溶液10μl，置干燥的衍生管中，加入缓冲液30μl，涡旋混合，加入衍生试剂60μl，涡旋混合15s，样品管用石蜡膜封口，于55℃加热10min，取出衍生所得样品放冷至22-28℃，转移至微量进样管中；

(4)混合对照品溶液衍生：精密量取混合对照品溶液10μl，与步骤(3)同法衍生操作；

(5)色谱：精密量取步骤(3)、步骤(4)衍生所得的样品各2μl，待手性色谱柱平衡好后，注入液相色谱仪，采集手性分离色谱图，记录色谱图至60min，查看分离效果。

进一步，步骤(5)所述色谱条件为：