[发明专利]索马鲁肽的固相合成方法

权利要求书

1.一种索马鲁肽的固相合成方法，其特征在于，其步骤具体如下：

（1）Fmoc-Ser(tBu)-CTC Resin的制备：

 取2-Cl-CTC树脂加入到固相反应器中，加入DMF溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Ser(tBu)-OH的DMF溶液、DIEA搅拌反应，抽干溶剂，加入DIEA/甲醇/DCM溶液，封闭；DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥后，得到Fmoc-Ser(tBu)-CTC Resin；

（2）第一片段的制备：

取Fmoc-Ser(tBu)-CTC Resin，加入反应柱中，加入DMF溶胀，抽干溶剂，加入哌啶/DMF溶液反应；抽干溶剂，加入DMF洗涤；茚检阳性；取Fmoc-Val-OH、HOBt、DIC，溶解于DMF，冰浴活化；将活化液加入到反应柱中反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；重复以上步骤，按照氨基酸序列，依次加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤；真空干燥，得索马鲁肽第一片段肽树脂，将肽树脂加入到TFE/DCM中，反应；收集滤液，滤液进行真空旋干；得索马鲁肽第一片段；

 （3）Fmoc-Ala-CTC Resin的制备：

 取2-Cl-CTC树脂加入到固相反应器中，加入DMF溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Ala-OH的DMF溶液、DIEA搅拌反应，抽干溶剂，加入DIEA/甲醇/DCM溶液，封闭；DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥后，得到Fmoc-Ala-CTC Resin；

（4）第二片段的制备：

取Fmoc-Ala-CTC Resin，加入反应柱中，加入DMF溶胀，抽干溶剂，加入哌啶/DMF溶液反应；抽干溶剂，加入DMF洗涤；茚检阳性；取Fmoc-Gln(trt)-OH、HOBt、DIC，溶解于DMF，冰浴活化；将活化液加入到反应柱中反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；重复以上步骤，按照氨基酸序列，依次加入Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH进行偶联反应；偶联结束后，DCM与甲醇交替洗涤；真空干燥，得索马鲁肽第二片段肽树脂，将肽树脂加入到TFE/DCM中，反应；收集滤液，滤液进行真空旋干；得索马鲁肽第二片段；

（5）Fmoc-Gly-Wang Resin的制备：

取Wang Resin加入到固相反应器中，加入DMF溶胀树脂；抽干溶剂，加入Fmoc-Gly-OH、HoBt、DIC，加入DMF溶液、搅拌反应，缓慢加入DMAP的DMF溶剂，抽干溶剂，加入AC2O/Py溶液，封闭；DCM与甲醇交替洗涤，真空干燥后，得到Fmoc-Gly-Wang Resin；

（6）第三片段的制备：

取Fmoc-Gly-Wang Resin，加入反应柱中，加入DMF溶胀，抽干溶剂，加入哌啶/DMF溶液反应；抽干溶剂，加入DMF洗涤；茚检阳性；取Fmoc-Gly-Arg(pbf)-OH、HOBt、DIC，溶解于DMF，冰浴活化；将活化液加入到反应柱中反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；重复以上步骤，按照氨基酸序列，依次加入Fmoc- Arg(pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH进行偶联反应；偶联结束后得第三片段；

（7）索马鲁肽肽树脂制备：

索马鲁肽第三片段肽树脂溶胀：将166.5g第三片段肽树脂置于反应柱中，加入1000mlDCM溶胀0.5h，抽干溶剂，加入800ml DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂；取第二片段、HOBt、DIC，溶解于DMF，冰浴活化；将活化液加入到反应柱中反应，茚检检测结果呈阴性后，抽干溶剂；加入DMF洗涤；重复以上步骤，偶联第三片段，完成后得索马鲁肽第一肽树脂，取四（三苯基膦）钯、苯硅烷加入反应柱中，以DCM为反应溶剂脱除Lys²⁰侧链ε氨基的保护基；以HoBt、DIC为缩合体系，哌啶/DMF溶液脱保护，依次偶联Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-γ-Glu-OtBu、十八烷二酸单叔丁酯，干燥得索马鲁肽肽树脂；

（8）索马鲁肽制备：配置裂解液TFA：phenol：Triisopropylsilane：H₂O=85:10:3:2，加入肽树脂反应，完成后抽滤，取滤液，将滤液加入到异丙醚中沉降，离心干燥得索马鲁肽粗品，经纯化制备，得成品索马鲁肽。