[发明专利]一种方格星虫非变性胶原蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种方格星虫非变性胶原蛋白的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将方格星虫去除内脏，清洗后剪成0.8-1.2mm×0.8-1.2mm的碎块，然后于0-4℃下采用异丙醇溶液除脂肪和氯化钠溶液处理除去方格星虫中的可溶性非胶原蛋白，获得预处理后的方格星虫；

(2)将上述预处理后的方格星虫与pH＝5-10的磷酸盐缓冲液混合后，以12000-18000rpm的转速于0-5℃分散10-30min；

(3)在步骤(2)所得的物料中加入2000-8000U/g的蛋白酶，该蛋白酶包括风味蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶中的至少一种，超声处理后于30-50℃下酶解3-5h，再于0-4℃下10000-12000rpm离心15-25min，获得上清液和沉淀；将上述沉淀用该步骤的工艺参数重复处理若干次，合并所得到的上清液，得到胶原蛋白粘液；然后将该胶原蛋白粘液经孔径为0.7-0.9μm的陶瓷膜过滤，获得透过液；

(4)于0-4℃，采用截留分子量10-50kDa的超滤膜对上述透过液进行分离提纯直至其电导率和pH趋于稳定，以除尽其中多余的酸和盐离子；

(5)于0-4℃，采用截留分子量300-1000Da的纳滤膜对步骤(4)所得的物料进行浓缩至纳滤膜的最终的进口压力变为最初的进口压力的1/4，除去多余的水分、无机盐及游离氨基酸；

(6)将步骤(5)所得的物料进行冷冻干燥，即得所述方格星虫非变性胶原蛋白。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)为：将方格星虫去除内脏，清洗后剪成0.8-1.2mm×0.8-1.2mm的碎块；将该碎块以1g∶10-30mL的比例浸泡于浓度为5-10％的异丙醇溶液中，于0-4℃下脱脂12-24h，然后用蒸馏水充分清洗，获得脱脂碎块；于0-4℃下，将脱脂碎块以1g∶10-20mL的比例浸泡于浓度为5-10％的氯化钠溶液中12-24h，最后用蒸馏水洗涤并沥干，获得预处理后的方格星虫。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述预处理后的方格星虫与pH＝5-10的磷酸盐缓冲液的比例为1g∶5-30mL。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述蛋白酶为风味蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶中的至少一种。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的超滤膜的进口压力为0.5-3.0MPa。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中的纳滤膜的最初的进口压力为0.5-2.0MPa。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)中的冷冻干燥为：-20--40℃下预冻24-48h，再放入-80℃冷冻干燥36-72h。