[发明专利]一种口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法

说明书

本发明公开了一种口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法，经过动物双歧杆菌菌悬液的制备、水相的配制、油相的配制、油包水型乳液的制备、固化、离心洗涤和冷冻干燥步骤，完成口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法；本发明制备工艺简单、高效，制备出的动物双歧杆菌微胶囊，能很好的耐受胃酸及胆盐，且肠溶性好，能在肠道中迅速繁殖。该微胶囊动物双歧杆菌口服后在胃部不解囊，最终顺利到达小肠，通过竞争性拮抗作用紧密结合肠粘膜上皮细胞，在肠道中生长、繁殖，直接补充正常生理细菌，抑制肠道中潜在危害致病菌，调整肠道的菌群平衡，提高机体免疫力。

技术领域

本发明涉及医药制造领域，具体涉及一种口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法。

背景技术

益生菌，1989年由英国学者Fuller定义为：一种通过调节和改善肠道微生态平衡，从而对宿主发挥有益作用的微生物添加物，因益生菌具有优越的生理功能而被广泛关注。

研究发现，益生菌发挥益生功能需要摄入10⁶-10⁷g^-1，同时其活性还会受到菌种自身生存能力、酸性环境、氧气和温度等因素的影响，于是，科学家们为了保持益生菌的活性提出了很多方法，而微胶囊则是公认的最为高效保持益生菌活力的方法。

但是现在的很多方法制备得到的微胶囊，耐胃酸、胆盐和肠溶性效果不佳。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备工艺简单高效、耐受胃酸及胆盐，且肠溶性好的口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法，经过动物双歧杆菌菌悬液的制备、水相的配制、油相的配制、油包水型乳液的制备、固化、离心洗涤和冷冻干燥步骤，完成口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备方法；具体步骤如下：

(1)动物双歧杆菌菌悬液的制备：

a.菌种的活化及发酵

将保存在冰箱中的菌种接种到固体培养基上，在37℃培养箱中厌氧培养22-24h，选取单菌落接种到液体培养基中，37℃培养箱中厌氧培养22-24h，活化好的菌种以1％-2％的接种量接种到液体培养基中，37℃环境下培养15-24h；

b.将培养好的菌液在高速旋转条件下进行离心处理，弃上清液，无菌生理盐水重悬，完成菌悬液的制备；

(2)水相的配制：制备质量浓度为1％-2％海藻酸钠溶液，磁力搅拌器搅拌，充分溶解后灭菌，加入菌悬液，混合均匀；

(3)油相的配制：制备含1％-5％span-80的植物油，搅拌均匀；

(4)油包水型乳液的制备：将水相加入至油相，搅拌器搅拌至均匀稳定的乳白色油包水乳液，反应温度为25-37℃；

(5)固化：加入质量浓度为3％-8％CaCl₂溶液，进行搅拌固化；

(6)离心洗涤：在5000r/min转速下离心5-10min，收集沉淀，用无菌生理盐水洗涤2-3次，得到微胶囊沉淀；

(7)冷冻干燥：将收集的微胶囊沉淀以1：3的比例加入到冻干保护剂中，搅拌均匀，置于冻干机中冻干，冷冻干燥结束后收集微胶囊动物双歧杆菌菌粉，在2-8℃环境下保存，即完成了口服式动物双歧杆菌微胶囊的制备。

进一步的，所述步骤(1)中的高速旋转的转速为5000r/min，离心时间为5-10min。

进一步的，所述步骤(4)中的转速为150-300r/min，搅拌时间为30min-1h。

进一步的，所述步骤(5)中的CaCl₂溶液添加量占总量的20％-50％。