[发明专利]一种痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法在审
| 申请号： | 201911003973.X | 申请日： | 2019-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN110684689A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 马英;贺轶轩;卢忠;杨勤萍;吴旸 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 31200 上海正旦专利代理有限公司 | 代理人： | 陆飞;陆尤 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 痤疮丙酸杆菌 生物膜 肉汤 布氏琼脂 菌体 微生物技术领域 葡萄糖 常规培养基 酵母提取物 振荡培养箱 菌落接种 生长条件 体外构建 厌氧环境 有效解决 振荡培养 重悬菌体 培养基 离心管 膜结构 生物量 血平板 干粉 称取 冻存 构建 活菌 菌株 水中 重悬 划线 融化 生长 | ||
1.一种痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤1：准备原料，称取35-40gBHI干粉，3-7g的酵母提取物；
步骤2：配置培养基，将35-40g BHI干粉、3-7g酵母提取物溶于0.8-1.2L水中，再加入葡萄糖配制成1%葡萄糖溶液，混合搅拌均匀，制得培养基，记为BHI Sup.培养基，调整培养基pH值为7.0；
步骤3：复苏种菌，将冻存的痤疮丙酸杆菌菌株于室温下融化，然后在血平板上划线种菌，待细菌复苏后接种于布氏琼脂肉汤，菌株的OD600nm均调整为0.08-0.12，使用振荡培养箱在振荡转速200-300rpm环境下35-38℃厌氧培养110-140h；
步骤4：重悬菌体，使用无菌离心管收集培养出的菌体，采用离心机处理，离心转速4000-6000rpm，时间5-8min，吸弃上层清液不用，然后使用布氏琼脂肉汤重悬菌体，调整OD600nm值至0.9-1.1；
步骤5：菌种培养，将重悬后的菌体以1:（100-200）比例使用BHI Sup.培养基进行稀释，然后加入96孔板，200ul／孔，37℃厌氧培养120h。
2.根据权利要求1所述的痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法，其特征在于，所述冻存的痤疮丙酸杆菌的菌种取自痤疮患者皮损处，经分离鉴定后获得，保证痤疮丙酸杆菌的纯净。
3.根据权利要求2所述的痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法，其特征在于，所述取得的痤疮丙酸杆菌菌种放置在甘油中，于-80℃中保存。
4.根据权利要求1所述的痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法，其特征在于，步骤1中所述酵母提取物使用高纯度高蛋白型酵母提取物。
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