[发明专利]红耳龟检测方法及用于检测红耳龟的PCR引物

权利要求书

1.一种红耳龟检测方法，其特征在于，包括：

获取多种不同龟类对应的多组脱氧核糖核酸DNA；

采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，分别对多组所述DNA进行聚合酶链式PCR扩增反应，得到对应的多组PCR产物；所述正向引物KM216748F的引物序列为：5′-TCTCAATTTTCTTCTAGGGT-3′；所述反向引物KM216748R的引物序列为：5′-GTTAGATGTTGTGGGTTA-3′；

采用琼脂糖凝胶分别对多组所述PCR产物进行电泳检测，对于每组所述PCR产物对应的电泳检测结果：

判断所述PCR产物对应的电泳检测结果中是否出现148碱基对bp大小的特征条带；

若所述PCR产物对应的电泳检测结果中出现148bp大小的特征条带，则确定所述PCR产物对应的DNA为红耳龟的DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶的浓度为1.5％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述获取多种不同龟类对应的多组DNA，包括：

获取多种不同龟类对应的多组样本组织；

采用丹尼斯血液和组织试剂盒DNeasy BloodTissue Kit提取每组所述样本组织的DNA，得到多组所述DNA。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，分别对多组所述DNA进行PCR扩增反应，包括：

对于每组所述DNA：

采用10微升μl的2×预混物Mastermix、7μl的双蒸水ddH₂O、1ul浓度为5微摩μM的1μl正向引物KM216748F和1μl浓度为5μM的反向引物KM216748R，在预设条件下对1μl的DNA进行PCR扩增反应。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述预设条件包括：

95℃预变性3min，95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环后72℃延伸10min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对每组所述PCR产物进行电泳检测的电泳条件包括：

电泳电压为135V、电泳时长为30min。

7.一种用于检测红耳龟的PCR引物，其特征在于，包括：

正向引物KM216748F，所述正向引物KM216748F的引物序列为：5′-TCTCAATTTTCTTCTAGGGT-3′；

反向引物KM216748R，所述反向引物KM216748R的引物序列为：5′-GTTAGATGTTGTGGGTTA-3′。