[发明专利]红耳龟检测方法及用于检测红耳龟的PCR引物

说明书

本发明提供一种红耳龟检测方法及用于检测红耳龟的PCR引物，涉及红耳龟检测技术领域。本发明可以通过获取多种不同龟类对应的多组DNA，采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，其中，正向引物KM216748F的引物序列为：5′‑TCTCAATTTTCTTCTAGGGT‑3′、反向引物KM216748R的引物序列为：5′‑GTTAGATGTTGTGGGTTA‑3′，分别对多组DNA进行PCR扩增反应，得到对应的多组PCR产物，分别对多组PCR产物进行电泳检测，确定电泳检测结果中存在电泳条带的PCR产物对应的DNA为红耳龟的DNA，实现了对红耳龟的特异性检测，可以为外来入侵物种红耳龟的野外分布快速识别提供有效手段，能够减少针对红耳龟进行防控时的耗时和成本,识别和监测红耳龟的效率高。

技术领域

本发明涉及红耳龟检测技术领域，具体而言，涉及一种红耳龟检测方法及用于检测红耳龟的PCR引物。

背景技术

红耳龟（Trachemys scripta elegans）因人工放生等原因进入野外自然环境，呈蔓延态势，已严重威胁栖息环境的本土龟类及生物多样性。因此，快速掌握红耳龟野外分布状况，开展早期的预警监测，是对其进行有效防控的关键。

目前，针对红耳龟进行防控所采取的方式通常为：通过野外调查、标本采集或拍照取证等方式，对野外的红耳龟进行识别和监测，从而掌握红耳龟的野外分布状况，进而实现预警监测。

但是，上述现有针对红耳龟进行防控所采取的方式较为耗时费力、识别和监测红耳龟的效率较为低下。

发明内容

本发明提供一种红耳龟检测方法及用于检测红耳龟的PCR引物，可以实现对红耳龟的快速检测。

第一方面，本发明实施例提供一种红耳龟检测方法，包括：

获取多种不同龟类对应的多组脱氧核糖核酸DNA；

采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，分别对多组DNA进行聚合酶链式PCR扩增反应，得到对应的多组PCR产物；正向引物KM216748F的引物序列为：5‘-TCTCAATTTTCTTCTAGGGT-3’；反向引物KM216748R的引物序列为：5‘-GTTAGATGTTGTGGGTTA-3’；

分别对多组PCR产物进行电泳检测，确定电泳检测结果中存在电泳条带的PCR产物对应的DNA为红耳龟的DNA。

可选地，上述分别对多组PCR产物进行电泳检测，包括：

采用琼脂糖凝胶对每组PCR产物进行电泳检测。

可选地，上述确定电泳检测结果中存在电泳条带的PCR产物对应的DNA为红耳龟的DNA，包括：

对于每组PCR产物对应的电泳检测结果：

判断PCR产物对应的电泳检测结果中是否出现148碱基对bp大小的特征条带；

若PCR产物对应的电泳检测结果中出现148bp大小的特征条带，则确定PCR产物对应的DNA为红耳龟的DNA。

可选地，琼脂糖凝胶的浓度为1.5%。

可选地，上述获取多种不同龟类对应的多组DNA，包括：

获取多种不同龟类对应的多组样本组织；

采用丹尼斯血液和组织试剂盒DNeasy Blood Tissue Kit提取每组样本组织的DNA，得到多组DNA。

可选地，上述采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，分别对多组DNA进行聚合酶链式PCR扩增反应，包括：

对于每组DNA：