[发明专利]一种利用木糖生产乙醇的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种重组菌的构建方法，所述方法包括对受体菌进行下述A1-A6的改造，得到所述重组菌；

A1、敲除所述受体菌的核酮糖磷酸异构酶基因或抑制所述核酮糖磷酸异构酶基因的表达或抑制所述核酮糖磷酸异构酶基因编码的蛋白质的活性，所述核酮糖磷酸异构酶基因的GeneBank号为NC_000913.3，GeneID为947896；

A2、敲除所述受体菌的丙酮酸氧化酶基因或抑制所述丙酮酸氧化酶基因的表达或抑制所述丙酮酸氧化酶基因编码的蛋白质的活性，丙酮酸氧化酶基因的GeneBank号为NC_000913.3，GeneID为946132；

A3、敲除所述受体菌的乙酸激酶基因或抑制所述乙酸激酶基因的表达或抑制所述乙酸激酶基因编码的蛋白质的活性，乙酸激酶基因的GeneBank号为NC_000913.3，GeneID为946775；

A4、增加所述受体菌中木酮糖裂解酶基因编码蛋白质的表达量或增强所述木酮糖裂解酶基因编码蛋白质的活性，所述木酮糖裂解酶基因可编码由SEQ ID No.7所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

A5、增加所述受体菌中磷酸转乙酰酶编码蛋白质的表达量或增强所述磷酸转乙酰酶基因编码蛋白质的活性，所述磷酸转乙酰酶基因可编码由SEQ ID No.8所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

A6、增加所述受体菌中双功能乙醛乙醇脱氢酶基因编码蛋白质的表达量或增强所述双功能乙醛乙醇脱氢酶基因编码蛋白质的活性，所述双功能乙醛乙醇脱氢酶基因可编码由SEQ ID No.9所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

所述受体菌为大肠杆菌。

2.根据权利要求 1所述的方法，其特征在于，所述受体菌为大肠杆菌MG1655或大肠杆菌JM109。

3.根据权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于，

所述木酮糖裂解酶基因为其编码序列是SEQ ID NO.1的第70-2458位核苷酸的cDNA或基因组DNA；

所述磷酸转乙酰酶为其编码序列是SEQ ID NO.2的第70-2215位核苷酸的cDNA或基因组DNA；

所述乙醛乙醇脱氢酶为其编码序列是SEQ ID NO.3的第70-2746位核苷酸的cDNA或基因组DNA。

4.一种权利要求1-3任一所述的重组菌构建方法构建的重组菌。

5.权利要求4中所述的重组菌在生产乙醇中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述 应用中以木糖为碳源进行乙醇生产。

7.一种通过权利要求4所述重组菌制备乙醇的方法，其特征在于，所述方法包括以木糖为碳源，利用所述重组菌进行生物转化，制备乙醇。