[发明专利]抗TNF-α单克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种纯化蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)亲和层析；

(b)病毒灭活；

(c)深层过滤；

(d)阴离子交换层析；

(e)阳离子交换层析。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述亲和层析的淋洗步骤包括淋洗缓冲液电导率的增加，例如先用含150mM氯化钠的50mM Tris-乙酸缓冲液进行冲洗，再用含1M氯化钠的50mM乙酸钠-乙酸缓冲液进行淋洗，最后用50mM的乙酸钠-乙酸缓冲液进行淋洗，所述亲和层析还包括采用较低pH的缓冲液对目的蛋白进行洗脱。

3.如权利要求1-2任一项所述的方法，其中阳离子交换层析步骤包括平衡，上样，淋洗三次，洗脱等。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其中阳离子交换层析淋洗过程包括缓冲液pH的改变。

5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述阳离子交换层析包括：

1)将产品加载到阳离子交换材料中，使所述组合物处于第一pH，

2)用第一淋洗缓冲液进行第一次淋洗，使所述组合物继续处于第一pH，

3)用第二淋洗缓冲液进行第二次淋洗，所述第二淋洗缓冲液具有第二pH，

4)用第三淋洗缓冲液进行第三次淋洗，所述第三淋洗缓冲液具有第三pH。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述第二pH比第一pH值至少高约1.5以上。

7.如权利要求5-6任一项所述的方法，其中所述第三pH比第二pH值至少低约2.0以上。

8.如权利要求1-5任一项所述的方法，所述方法还包括在淋洗后用电导率大于所述第一淋洗缓冲液、第二淋洗缓冲液和第三淋洗缓冲液的洗脱液洗涤目的蛋白。

9.如权利要求1-8任一项所述的方法，其中所述蛋白是抗体，优选为特异结合TNF-α的单克隆抗体，更优选为阿达木单抗。

10.药物组合物的制备工艺，所述工艺包括采用权利要求1-9任一项所述的方法对蛋白质进行纯化。