[发明专利]一种高活力乳糖酶基因及其重组蛋白的制备方法与应用

权利要求书

1.一种重组载体，由空载体和插入该空载体的目的基因组成，其特征在于，所述目的基因的序列为序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列，所述空载体为pPICZαA载体。

2.一种乳糖酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因重组到pPICZαA载体中，经转化到毕赤酵母宿主菌细胞中并用1000μg/mL Zeocin的YPD平板筛选得到高Zeocin抗性的转化子；

2)将步骤1)所得的转化子用BMGY培养基培养至OD600为10～12，离心收集细胞沉淀，用BMMY培养基重悬细胞，加入甲醇并使其质量分数为1～2％，诱导1～3d，筛选高水平分泌表达乳糖酶的转化子；

3)高水平分泌表达乳糖酶的转化子用BMGY大量生长培养，之后用BMMY培养基重悬细胞并在28℃继续诱导培养，补加甲醇使其质量分数保持在1～2％。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括蛋白纯化步骤：用镍亲合层析柱对步骤3)得到的上清液进行纯化，先用平衡缓冲液平衡层析柱，再将上清液过柱，用含30mM咪唑的pH 8.0缓冲液预洗柱子，然后用含200mM咪唑的pH 8.0缓冲液溶液将目标蛋白洗脱下来即可。

4.根据权利要求2或3所述制备方法得到的蛋白在乳制品中乳糖的转化中的应用。