[发明专利]一种链式NK细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201911008852.4 | 申请日： | 2019-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN110643573A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 孔德照;陈杰;方松刚 | 申请（专利权）人： | 武汉济源高科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 430073 湖北省武汉市东湖高新技术*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增培养 链式 激活 临床治疗肿瘤 单个核细胞 单克隆抗体 人外周血 细胞生长 细胞因子 自然杀伤 自体细胞 高表达 高纯度 高基数 培养瓶 饲养层 包被 补液 活化 脐血 骨髓 | ||
1.一种链式NK细胞的培养方法，其特征在于，培养过程包括如下步骤：提前用抗体和细胞因子包被培养瓶，培养第1天先进行细胞第1步激活，3h后进行细胞因子组合刺激培养，再3h后进行细胞第2步激活，以后每天根据细胞密度添加培养基扩大培养，第5天时添加细胞因子组合继续培养，直至培养至第14天。
2.根据权利要求1所述的步骤，其特征在于，包被用的抗体和细胞因子以及浓度分别为CD56单抗1～10ug/ml 、CD16单抗1～10ug/ml、IL-21因子1～100ng/ml、IL-15因子1～100ng/ml。
3.根据权利要求1所述的步骤，其特征在于，所述培养基为无血清培养基, 含IL-2终浓度为300～1000IU/ml。
4.根据权利要求1所述的步骤，其特征在于，所述的第1天细胞第1步激活，方法如下：把血液中分离得到的单个核细胞分为A和B俩等份细胞悬液，细胞悬液A体积为5～20ml,浓度控制在0.5～3×106/ml，含自身血清10%，激活时间为3h。
5.根据权利要求1所述的步骤，其特征在于，所述的3h后细胞因子组合刺激培养，具体细胞因子组合为IL-21和IL-15，IL-21终浓度为1～100ng/ml，IL-15 终浓度1～100ng/ml，刺激培养时间为3h。
6.根据权利要求1、4所述的步骤，其特征在于，所述的细胞第2步激活，方法如下：B等份细胞悬液体积为5～20ml,浓度控制在0.5～3×106/ml，含自身血清10%。
7.根据权利要求1所述的步骤，其特征在于，所述的第5天添加细胞因子组合为因子IL-15和IL-21，IL-15终浓度为1～100ng/ml，因子IL-21终浓度为1～100ng/ml。
8.根据权利要求1所述的步骤，其特征在于，所述的以后每天根据细胞密度添加培养基扩大培养，方法如下：每天计数细胞密度，及时添加GT-T551完全培养基，及自身血清体积10%，控制细胞浓度为1×106/ml。
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