[发明专利]一种包埋蛋清源活性肽的纳米脂质体的制备方法

说明书

本发明提供了一种包埋蛋清活性肽的纳米脂质体的制备方法。目的是解决蛋清活性肽在胃液和肠液中极易被降解而不能被完整吸收的问题。其制备方法为将卵磷脂、胆固醇等成膜材料溶解于乙醇中后通过高速均质和高压均质减小粒径后滴入溶解蛋清活性肽的水溶液中，形成包埋蛋清源活性肽的纳米脂质体。本发明填补了保护和促进蛋清源活性肽的生物吸收利用方面的空白,对于蛋白高值化利用和短肽营养产业发展具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生理活性物质的包封方法技术领域，特别涉及制备具有持续释放特性一种包埋蛋清源活性肽的纳米脂质体及其制备方法。

背景技术

鸡蛋的营养成分相当丰富，可以快速补充各种营养物质，鸡蛋的热量仅为半杯牛奶，但其它营养成分却比牛奶高得多。鸡蛋中脂类物质含量丰富，集中在蛋黄部分，其中蛋黄卵磷脂约占10％～15％左右。蛋黄卵磷脂有清除自由基、延缓机体衰老、促进脂质代谢、参与神经传导、辅助改善记忆力、增强人体免疫力等功能。蛋清中含有大量高生物价值的蛋清蛋白，鸡蛋清中蛋白质含量较多,含有多种人体必需氨基酸,是获取生物活性肽的良好蛋白质资源。

蛋清蛋白被酶解后得到由氨基酸组成的多个肽段,即蛋清源活性肽,蛋清源活性肽具有独特的体内或体外生物活性,营养价值高,生物活性多样,几乎无毒副作用等优点,但由于其在体内胃肠道消化系统中极易被降解而不能以完整形式被吸收,而蛋清源活性肽要在体内发挥生物活性就必须通过胃肠道复杂的消化酶降解,然后以完整形式透过小肠上皮吸收渗透屏障,被机体完整吸收后,再通过血液循环等输送到作用靶点,且积累到一定的量才有可能最终实现其发挥调节生理功能的作用。因此,开发一种对蛋清源活性肽进行有效保护的技术手段以提高其稳定性和体内吸收利用率迫在眉睫。

脂质体(1iposome)亦称类脂小球，是指将药物包埋于两亲性类脂分子所形成的磷脂双分子层结构内的封闭囊泡，与细胞膜结构类似，主要是由磷脂和胆固醇构成，脂质体可以既可以包埋水溶性药物，也可以包埋脂溶性药物。脂质体作为药物载体，其在生物体内易降解、无免疫性、无毒及能控制药物释放、减少药物毒性等特点，受到重视并得到广泛应用。利用脂质体作为纳米壁材对蛋清源活性肽进行包埋保护具有重要意义。

国内外短肽生理活性研究开展较为广泛，但其实际应用研究明显不足。短肽经过胃肠道消化酶系和高酸性环境后，降解严重，进入小肠细胞后，又会被肽酶所降解，因此，短肽能够以完整状态发挥生理活性的可能性很小，这使得大多数研究无法开展实际应用。因此分析蛋白改性机制及短肽完整转运过程，为短肽体内输送提供理论参考，对于蛋白高值化利用和短肽营养产业发展具有重要意义。

发明内容

步骤一、脂质体制备：

取一定量的蛋黄卵磷脂、胆固醇溶解于95％热乙醇中，使得卵磷脂浓度为0.5mg/ml～20mg/ml，胆固醇浓度为0.1mg/ml～2mg/ml，使用高速均质机以19，000rpm均化5min，进行初步均质，后使用高压均质机进行高压均质，均质压力10～60mpa，均质时间1～11min。得到粒径<150nm,电势小于-25mV，稳定性好的空白脂质体。

步骤二、蛋清源活性肽制备：

取一定量蛋清蛋白粉,按料液质量比为1：5～1：20配制成蛋清蛋白粉原料液,加热至80℃～100℃,持续5～10min,进行变性处理,然后冷却至50℃～60℃,调节PH值至8-11,加入碱性蛋白酶,持续水解2h～3h后,进行沸水浴灭酶,最后离心9000r/min 10min处理,取上清液,用分子量小于1kDa超滤纳滤装置进行超滤纳滤，将滤液浓缩，浓缩后,得到蛋清源活性肽。

步骤三、包埋蛋清源活性肽的脂质体制备