[发明专利]人纤维蛋白体外降解方法

权利要求书

1.人纤维蛋白体外降解方法，包括：

将人纤维蛋白以Tris缓冲液重悬，搅拌10～20min后，弃除液体进行研磨；

所述研磨的产物以Tris降解缓冲液重悬，加入纤溶酶，37℃，100rpm摇床酶解；

所述酶解的产物经4000rpm离心30min取上清，与2×冻干缓冲液混合，进行赋值后冻干，制得人纤维蛋白降解产物；

所述Tris降解缓冲液包括：50mM Tris-HCl，0.9％的NaCl，0.1％苯甲酸钠，pH值为8.5；

所述2×冻干缓冲液包括：Hepes 4wt％、海藻糖1g/L、牛白蛋白70g/L、甘露醇40g/L、苯甲酸钠0.2wt％，pH值为7.6～7.8；

所述冻干的程序为：0～3h，20℃→-50℃；3h～4h，保持-50℃；4h～6h，-50℃→-25℃；6h～12h，保持-25℃；12h～16h，-25℃→0℃；16h～17h，0℃→25℃；25℃保持；

所述人纤维蛋白的制备方法为：

将血浆与等体积25mM的CaCl₂溶液混合，然后加入凝血酶至浓度为2～3U/mL，混匀后37℃放置30min获得交联纤维蛋白，以Tris降解缓冲液清洗后，获得人纤维蛋白。

2.根据权利要求1所述的降解方法，其特征在于，

所述搅拌的时间为15min，转速为100～200rpm；

所述研磨的条件为时间为10～20min，研磨至乳胶状。

3.根据权利要求1所述的降解方法，其特征在于，所述研磨的产物以Tris降解缓冲液重悬至研磨产物的质量分数为1％。

4.根据权利要求1所述的降解方法，其特征在于，每克研磨产物加入纤溶酶的量为3.6U。

5.根据权利要求4所述的降解方法，其特征在于，所述纤溶酶以生理盐水配制成浓度为150U/mL。

6.根据权利要求1所述的降解方法，其特征在于，所述上清与2×冻干缓冲液混合的体积比为1：1。

7.根据权利要求1所述的降解方法，其特征在于，所述赋值前与2×冻干缓冲液混合的液体于-20℃冻存，赋值前于37℃复溶。

8.根据权利要求1所述的降解方法，其特征在于，所述赋值包括以1×冻干缓冲液调整FDP或D-二聚体的浓度；

FDP质控I赋值为4～6μg/mL，质控II赋值为20～30μg/mL；

D-二聚体质控I赋值为0.4～0.6μg/mL，质控II赋值为2.8～3.5μg/mL；

所述1×冻干缓冲液包括：Hepes 2wt％、海藻糖0.5g/L、牛白蛋白35g/L、甘露醇20g/L、苯甲酸钠0.1wt％，pH值为7.6～7.8。

9.权利要求1～8任一项所述的降解方法制得的降解产物在制备试剂盒中质控品和/或校准品中的应用；或在制备免疫抗原或筛选相应的抗体中的应用。