[发明专利]一种水产品中泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法

说明书

本发明公开了一种水产品中泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法，包括以下步骤：（1）样品预处理；（2）提取；（3）净化；（4）浓缩转溶。本发明采用分散固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法测定技术，通过仪器条件、样品预处理、提取方式和PSA净化条件的优化，提高了实验效率，方法的检出限为0.1μg/kg，回收率在82.5%～95.4%之间，灵敏度高、准确性与重现性好、适用性强，且检出限、定量限以及回收率均能满足水产品质量检测的要求，实现了泰妙菌素和沃尼妙林等兽药残留的快速检测。

技术领域

本发明涉及泰妙菌素和沃尼妙林的检测技术领域，尤其是涉及一种水产品中泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法。

背景技术

20世50年代，学者从高等真菌Pleurotus multilus(Fr.)Sacc.和P.passecke-rianus Pilat中分离获得截短侧耳素，这是具有抗菌活性的双萜类化合物，它包括一个含有8个手性碳原子的5-6-8三元环骨架和一个乙醇酸酯侧链。泰妙菌素、沃尼妙林是经过化学修饰后，具有很强的抗耐药菌活性的截短侧耳素类药物，最早研发用于防治革兰氏阳性细菌、支原体等疾病的。

泰妙菌素和沃尼妙林具有抗菌谱广、毒性小等特点，对生殖支原体、猪密螺旋体以及水产品都有良好的抗菌性。研究表明，少量使用泰妙菌素及沃尼妙林，能够促进水产品的生长，减少病虫害的危害。但是在实际生产养殖过程中，存在着滥用泰妙菌素和沃尼妙林的现象，大量地使用泰妙菌素和沃尼妙林会使水产品体内蓄积并导致无法完全代谢，最终通过水产品消费进入人体并带来潜在危害。我国农业部235公告中对猪、兔、鸡中的泰妙菌素的残留做出了严格的规定，但对水产品中的泰妙菌素和沃尼妙林还未有明确限量规定。因此建立一种方便、有效、准确的检测方法极为重要，以便研究水产品中泰妙菌素及沃尼妙林的给药量和休药期。

目前据已有文献报道，泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)等，而上述方法存在回收率与灵敏度低，准确性较差的缺陷。

发明内容

本发明是为了解决现有技术的泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法所存在的上述技术的问题，提供了一种水产品中泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法，灵敏度高、准确性与重现性好、适用性强，且检出限、定量限以及回收率均能满足水产品质量检测的要求，实现了泰妙菌素和沃尼妙林等兽药残留的快速检测。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种水产品中泰妙菌素和沃尼妙林的检测方法，包括以下步骤：

(1)样品预处理：将水产品组织样品置于薄膜袋中密封后进行微冻，将微冻的样品进行间歇研磨匀质，得到匀质样品。目前水产品组织样品通常是在常温下直接进行一次研磨匀质，在研磨匀质过程中会产生热量，使水产品组织样品温度增加，时间越长，速度越快，热量也越高，水产品组织样品温度也较高，会导致水产品组织受热，其中的蛋白质变性凝固，水产品组织样品不易破碎，得到的匀质样品不均匀，不利于后续对目标组分的提取，因此，本发明中对水产品组织样品进行微冻处理，微冻处理能使水产品组织样品中产生少量的冰晶，这些少量的冰晶既能在研磨匀质中吸收产生的热量，避免匀质温度快速升高，同时能提高摩擦力，提高研磨速度和效果，可谓是一举两得，若将水产品组织样品完全冻结，由于水产品组织样品含水较多，完全冻结成块后，反而使得水产品组织样品不易研磨匀质；另外，本发明中采用“化整为零”的间歇研磨匀质，根据实际情况将水产品组织样品分为多次进行研磨匀质，即研磨一段时间后停顿一会，重复几次，既保证了水产品组织样品的研磨效果，又保证了水产品组织样品温度不会过度升高。