[发明专利]基于nanoBRET的促蛋白泛素化降解药物筛选系统及方法有效
| 申请号： | 201911013063.X | 申请日： | 2019-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN110835641B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 王自峰;刘强;唐照;雷鑫星;穆罕默德·卡姆兰·拉贾;刘芳;刘美玲;张海亮 | 申请（专利权）人： | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院;中山大学肿瘤研究所） |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;G01N21/64 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 510060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 nanobret 蛋白 泛素化 降解 药物 筛选 系统 方法 | ||
1.一种基于生物发光共振能量转移的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，包括：
荧光蛋白修饰的泛素表达质粒，用于表达荧光蛋白修饰的泛素；
内源性泛素基因UBB及UBC敲除的细胞系；以及
靶蛋白-荧光素酶融合蛋白；
所述荧光蛋白为长斯托克位移蛋白LSSmOrange；
所述荧光素酶为NanoLuc luciferase。
2.根据权利要求1所述的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，其特征在于：所述泛素包括野生型和突变型泛素。
3.根据权利要求2所述的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，其特征在于：所述突变型泛素包括K6, K11,K27, K29, K33, K48和K63型泛素。
4.根据权利要求1所述的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，其特征在于：所述靶蛋白-荧光素酶融合蛋白以表达质粒的方式引入。
5.根据权利要求1～4任一项所述的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，其特征在于：所述促蛋白泛素化降解药物筛选系统还添加有蛋白酶体抑制剂。
6.根据权利要求1所述的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，其特征在于：所述蛋白酶体抑制剂为MG132。
7.根据权利要求1～4任一项所述的促蛋白泛素化降解药物筛选系统，其特征在于：荧光蛋白修饰在泛素的N端。
8.一种促蛋白泛素化降解药物的筛选方法，其筛选系统如权利要求1～7任一项所述，其筛选步骤包括：
1)将荧光蛋白修饰的泛素表达质粒、靶蛋白-荧光素酶融合蛋白的表达质粒转入内源性泛素基因UBB及UBC敲除的细胞系并表达；
2)加入待筛选化合物及荧光素酶底物，检测其作用后的荧光值；
3)比较不同处理的荧光值差异，确定化合物是否可以促蛋白泛素化降解。
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