[发明专利]在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法

权利要求书

1.在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法，所述方法用于评价药物影响肠道菌群的活性，所述药物能够抑制或促进肠道细菌生长代谢，其步骤包括：

药物施加时或之后，利用细菌广谱荧光物质原位标记肠道菌群，所述细菌广谱荧光物质能够特异性标记细菌；

分离肠道菌群，利用细菌特异性标记物质或其组合标记不同种属细菌，统计肠道菌群中细菌广谱荧光物质和细菌特异性标记物质或其组合的荧光强度用于分析不同种属细菌的代谢活性，以得出药物活性结果。

2.如权利要求1所述的在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法，其特征在于，所述细菌广谱荧光物质通过代谢标记方式标记细菌；优选的，所述细菌广谱荧光物质在肽聚糖合成和\或代谢时取代D-型丙氨酸；更优选的，所述细菌广谱荧光物质为带有荧光基团的D-型氨基酸，优选为D-型氨基酸-Cy5。

3.如权利要求1所述的在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法，其特征在于，所述细菌特异性标记物质或其组合用于特异性区分不同种属细菌，优选地用于分别标记革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，优选地用于分别标记梭菌目(Clostridiales)、毛螺菌科(Lachnoclostridium)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)、拟杆菌S24-7簇(Bacteroidalescluster S24-7)、普雷沃菌属(Prevotella)、艾克曼菌属(Akkermansia)、另枝菌属(Alistipes)、副杆菌属(Parabacteroides)、巴恩斯氏菌属(Barnesiella)、理研菌属(Rikenella)、拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、Lachnoclostridium菌属、罗斯氏菌属(Roseburia)、Lachnospiracea_incertae_sedis菌属、Segmented filamentous bacteria菌属、颤杆菌克属(Oscillibacter)、Anaerotruncus菌属、Acetatifactor菌属、梭菌属(Clostridium)、Clostridium_sp._ASF502菌、Clostridium_sp._KNHs209菌、Clostridium_sp._ATCC_BAA-442菌、Alistipes putredinis菌、狄氏副拟杆菌(Parabacteroidesdistasonis)、嗜粘蛋白-艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)。

4.如权利要求1-3任一项所述的在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法，其特征在于，所述细菌特异性标记物质或其组合为荧光探针组合或带荧光标记物的抗体组合；优选地FISH探针组合。

5.如权利要求4所述的在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法，其特征在于，所述FISH探针组合为包含至少一种FISH探针的混合液，优选地所述FISH探针包含序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:25所示探针的一种或两种及以上。

6.如权利要求1-5任一项所述的在体筛选具有潜在微生物调节能力的药物的方法，进一步包括如下步骤：识别双荧光信号的细菌群，分析实验组和对照组的双荧光信号细菌群的细菌广谱性荧光物质的信号强度的差别，以用于判断细菌的代谢活性。