[发明专利]一种提高回收率的鸡粪抗生素提取和净化方法

说明书

本发明属于环境中痕量污染物分析检测领域，涉及一种提高回收率的鸡粪抗生素提取和净化方法。针对现有技术中提取不同类型的抗生素时，其适用的适宜提取液组成和pH条件不同的问题，本发明的技术方案是：在步骤2‑步骤5中，首先确认适用于对应样品的提取液的适宜的pH条件、组分条件和组合使用条件。随后采用适宜条件的提取液提取鸡粪样品，在步骤6‑步骤9中，确定过HLB固相萃取小柱前提取物溶液适宜的pH条件。最后采用上述确定的适宜的条件对鸡粪样品进行提取、净化和检测。这样能够保证对鸡粪样品中的抗生素具有高的回收率，从而使得检测结果更加准确。本发明方法适用于对鸡粪中的抗生素含量进行检测。

技术领域

本发明属于环境中痕量污染物分析检测领域，涉及一种提高回收率的鸡粪抗生素提取和净化方法。具体涉及磺胺二甲异嘧啶、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉17种磺胺类抗生素；诺氟沙星、环丙沙星、恩氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、达氟沙星、甲磺酸培氟沙星、洛美沙星、氟罗沙星9种喹诺酮类抗生素；四环素，土霉素，金霉素和强力霉素4种四环素类抗生素；甲氧苄氨嘧啶和奥美普林2种抗生素增效剂。

背景技术

抗生素主要用于治疗各种细菌感染或致病微生物感染类疾病，抗生素的使用分为治疗性使用和预防性使用两种。抗生素在饲料添加剂中得到了广泛应用，饲料中添加抗生素对动物某些疾病的治疗作用是抗生素的正常药理作用。对某些动物疫病的预防作用，保证畜禽的健康生长；改善动物饲养环境，因为抗生素使环境中各种致病菌减少；提高动物机能的抵抗力，增强动物应付外界不良环境的能力，以及减少动物因各种应激反应所造成的损失等等。

由于饲料中添加抗生素具有多种优点，因此出现饲料抗生素的乱用和滥用现象，长期使用所带来的耐药性、药物残留和环境污染等问题，最终威胁人类健康。农业部要求全面禁止在动物饲料中添加抗生素，虽然禁用抗生素的呼声很高，但实际养殖生产中抗生素应用仍然十分广泛，用量也越来越大，甚至在一些地方出现滥用。

通过动物粪便中抗生素残留检测是一种较为直接方便了解养殖户使用抗生素的情况。抗生素测定包括样品前处理和测定两个步骤。样品前处理包括样品采集冷冻干燥粉碎过筛预处理，提取、HLB固相萃取净化浓缩、洗脱、氮吹干燥浓缩、定容等环节，每个环节严格控制条件保障结果的准确性。抗生素的提取中提取液的组成、pH和提取温度以及固相萃取净化浓缩条件等都是影响测定结果的重要因素，因此现有技术有的采用控温超声和控温离心控制提取的温度条件并严格控制提取液的组成和pH以及过固相萃取小柱的提取物溶液的pH。目前有关抗生素检测的报道较多，以高效液相色谱-质谱联用技术检测方法为主。

然而，在现有技术中各种提取方法只会采用一种确定的根据经验、文献报道或标准样品测试等方式优选的提取液pH和温度等条件对鸡粪进行提取。动物粪便组成复杂，根据动物的饲料、环境因素和动物的生理因素，技术人员优选的提取液组成和pH条件并不一定适用于所有的鸡粪样品，此外，针对同一鸡粪样品，提取不同类型的抗生素其最适宜的条件也是不同的，提取液的组成和pH会对所提取的抗生素类别和提取率产生影响，从而导致检测结果和结论不准确。

发明内容

针对现有技术中提取抗生素时，对于不同的鸡粪样品，其适用的适宜提取液组成和pH条件不同的问题，本发明提供一种提高回收率的鸡粪抗生素提取和净化方法，其目的在于：通过空白加标和样品加标回收率的测定选择提取条件和提取物溶液过HLB小柱的净化条件，优化同时适合磺胺类、喹诺酮类和四环素类的方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种提高回收率的鸡粪抗生素提取和净化方法，包括如下步骤：

步骤1：对鸡粪样品进行冷冻干燥、粉碎和过筛；

步骤2：配制待检抗生素的混标使用液，向经过步骤1处理的鸡粪样品中加入混标使用液；