[发明专利]以纳米金为显色探针的磷酸吡哆醛快速测定方法

说明书

本发明公开一种纳米金为显色探针的磷酸吡哆醛快速测定方法，其特征是利用磷酸吡哆醛与纳米金作用，导致纳米金聚集而表现出溶液颜色和紫外‑可见吸收光谱特征的变化，来测定磷酸吡哆醛浓度。当目视观察颜色特征时，随着磷酸吡哆醛浓度的逐渐增大（0~0.5μmol/L），巯基乙胺‑纳米金的颜色由酒红色→粉红色→紫色→蓝色进行变化；当测定吸光度比值A₇₀₀/A₅₂₅时，磷酸吡哆醛浓度在0.25~0.5μmol/L范围内变化时，巯基乙胺‑纳米金的吸光度比值A₇₀₀/A₅₂₅随着磷酸吡哆醛浓度的增加而增大。

技术领域

本发明涉及以纳米金为显色探针的磷酸吡哆醛含量快速测定方法，属于分析化学和纳米技术领域。

背景技术

金纳米粒子由于其易于制备和生物功能化、优良的生物稳定性和独特的光谱特性已受到广泛的关注。金纳米粒子的表面等离子吸收带位于电磁波谱的可见光区，并受纳米聚集体的形貌的影响。典型的胶体纳米金粒子为酒红色，而它们的聚集体则呈现紫色或蓝色，这是由于纳米金的表面等离子吸收带向长波长移动所致。基于这一原理的方法可用于细胞、蛋白质、DNA、金属离子等各种分析物的检测。

磷酸吡哆醛又称磷酸-5’-吡哆醛，是维生素B₆的辅酶形式，参与氨基酸代谢中的转氨基作用，它主要用于生化研究，孕甾酮特性的结构修饰和酶抑制剂等。在医药方面，磷酸吡哆醛是维生素B₆的主要药物原料。因此，发展快速、灵敏检测的磷酸吡哆醛方法，具有十分重要的意义。迄今为止，包括电化学法、荧光光谱法和高效液相色谱法等各种技术已被应用于磷酸吡哆醛的检测。虽然大多数的上述技术，可以灵敏、选择性地检测磷酸吡哆醛，但是精密仪器和训练有素的操作人员的需求限制了它们在常规检测中的应用。

本发明以巯基乙胺-纳米金作为显色探针，提供了一种快速、简便、灵敏的磷酸吡哆醛检测新方法。

发明内容

本发明的目的是以巯基乙胺-纳米金为显色探针，利用纳米金与磷酸吡哆醛相互作用后其分散状态的变化，提供了一种快速、简便、灵敏的磷酸吡哆醛测定方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种纳米金为显色探针的磷酸吡哆醛快速测定方法，其特征是利用磷酸吡哆醛与纳米金作用，导致纳米金聚集而表现出溶液颜色和紫外-可见吸收光谱特征的变化，来测定磷酸吡哆醛浓度；利用纳米金溶液颜色的变化以判断磷酸吡哆醛的浓度；所使用纳米金由以下步骤制备得到：首先，取400 μL浓度为213 mmol/L的巯基乙胺盐酸盐和2.23 mL浓度为10 mg/mL的HAuCl₄加入到含37.5 mL水的烧杯中，室温搅拌反应20 min；结束后，向上述反应液中加入10 μL浓度为10 mmol/L的NaBH₄，而后继续室温搅拌反应30 min，即得巯基乙胺-纳米金粗品；将所制得的巯基乙胺-纳米金粗品用截留分子量为7000的透析袋进行纯化处理，得到巯基乙胺-纳米金纯品；将所得巯基乙胺-纳米金纯品密封避光，置于4 ℃冰箱保存、备用。

一种纳米金为显色探针的磷酸吡哆醛快速测定方法，其特征是其特征是利用磷酸吡哆醛与纳米金作用，导致纳米金聚集而表现出溶液颜色和紫外-可见吸收光谱特征的变化，来测定磷酸吡哆醛浓度；利用纳米金在700 nm与525 nm波长处的吸光度比值（A₇₀₀/A₅₂₅）变化以测定磷酸吡哆醛的浓度；所使用纳米金由以下步骤制备得到：首先，取400 μL浓度为213 mmol/L的巯基乙胺盐酸盐和2.23 mL浓度为10 mg/mL的HAuCl₄加入到含37.5 mL水的烧杯中，室温搅拌反应20 min；结束后，向上述反应液中加入10 μL浓度为10 mmol/L的NaBH₄，而后继续室温搅拌反应30 min，即得巯基乙胺-纳米金粗品；将所制得的巯基乙胺-纳米金粗品用截留分子量为7000的透析袋进行纯化处理，得到巯基乙胺-纳米金纯品；将所得巯基乙胺-纳米金纯品密封避光，置于4 ℃冰箱保存、备用。