[发明专利]禽减蛋综合症病毒新型基因工程疫苗、其制备方法与应用

说明书

本发明揭示了一种抗原蛋白的制备方法，包括：将密码子优化的重组禽减蛋综合症病毒Core蛋白、Fiber蛋白、Penton蛋白及Hexon蛋白的编码基因分别克隆到多个重组穿梭载体上；分别将该多个重组穿梭载体转化感受态宿主细胞，获得多个重组杆状病毒载体；以该多个重组杆状病毒载体分别转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；以上述重组杆状病毒共感染昆虫细胞，使其在细胞内自动组装成VLP，并表达抗原蛋白。本发明还揭示了一种包含所述抗原蛋白的免疫组合物，其可用于制备禽减蛋综合症病毒基因工程亚单位疫苗，该疫苗的结构、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平高，免疫原性强，对动物没有致病性，并且可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，生产成本低。

技术领域

本发明涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种禽减蛋综合症病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用，属于动物免疫药物技术领域。

背景技术

禽减蛋综合症(Egg Drop Syndrome，EDS)是一种使产蛋鸡或种母鸡产蛋率下降的病毒性传染病。EDS无临床症状，或可见轻微程度腹泻，多发生于产卵高峰期的30～40周龄，会引起被感染鸡群持续3～8周产下蛋壳畸形蛋或产蛋量下降，因此，经济损失巨大。免疫接种是预防本病的主要措施，鸡群在进入产蛋前全部产生抗体，产蛋将不受影响。

禽减蛋综合症病毒(Egg Drop Syndrome Virus,EDSV)属于禽腺病毒Ⅲ群，血清型单一，菌株之间几乎不存在抗原性差异，病毒基因组为约33kb的线状双股DNA，病毒颗粒由结构蛋白组成，核衣壳直径70～80nm，呈二十面体对称，DNA被包于衣壳内。该结构蛋白包括核心蛋白(Core Protein)、构成衣壳的六邻体(Hexon蛋白)、以纤维状突起从衣壳突出的三聚体纤维突出(Fiber蛋白)及作为其基部的五邻体(Penton蛋白)等。其中，六邻体、纤维及五邻体基座存在中和表位，其中的Fiber蛋白与入侵宿主细胞有关。

禽减蛋综合症是当前世界范围内严重危害家禽养殖业发展的重要疾病之一。在各种防控措施中，疫苗免疫仍为最重要的措施。目前养禽业中普遍使用的是EDS灭活疫苗，但是由于禽减蛋综合症病毒在鸭胚上培养难以获得高滴度的病毒，导致制备的疫苗往往难以提供理想的免疫效果。另外全病毒疫苗生产过程中还存在病毒灭活不完全造成的生物安全方面的风险。

亚单位疫苗是近几年发展起来的一种比较切实可行的新型基因工程疫苗，至今未有禽减蛋综合症亚单位疫苗上市。CN108653724A公开了一种用大肠杆菌表达系统表达的禽减蛋综合症病毒Fiber蛋白基因工程亚单位疫苗的制备方法，CN106232813A公开了一种以大肠杆菌表达系统表达融合蛋白的亚单位疫苗，但是大肠杆菌表达系统表达出的蛋白折叠性较差、免疫原性差，并且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白，可能混杂在终产物里。因此，临床上急需开发出免疫效果好的亚单位疫苗组合物，以期能够有效防止该病的流行。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种禽减蛋综合症病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用，以克服现有技术中的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种抗原蛋白的制备方法，其包括：

将重组禽减蛋综合症病毒Core蛋白及Fiber蛋白的编码基因克隆到穿梭载体上，得到第一重组穿梭载体；

将重组禽减蛋综合症病毒Penton蛋白及Hexon蛋白的编码基因克隆到穿梭载体上，得到第二重组穿梭载体；

分别将第一重组穿梭载体、第二重组穿梭载体转化DH10Bac菌，获得第一重组杆状病毒载体、第二重组杆状病毒载体；

利用所述第一重组杆状病毒载体、第二重组杆状病毒载体分别转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；

以所述重组杆状病毒同时接种昆虫细胞，并表达抗原蛋白。