[发明专利]一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201911025714.7 | 申请日： | 2019-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN110616280A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 于志君;朱彤;高月花;吴家强;陈为京 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院家禽研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 37221 济南圣达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 郑平 |
| 地址： | 250023 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 流感病毒 检测 试剂盒 实时荧光定量PCR 应用 分子检测技术 流行病学调查 高敏感度 特异性强 疫病诊断 敏感度 种检测 生物工程 基层 | ||
1.一种引物对，其特征在于，所述引物对由引物F1和引物R1组成；
所述引物F1为如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物R1为如下(a3)或(a4)：
(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。
2.权利要求1所述引物对的用途如下：
(b1)鉴定或辅助鉴定牛C型流感病毒；
(b2)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有牛C型流感病毒。
3.权利要求1所述引物对在制备试剂盒中的应用；
所述试剂盒的用途如下：
(b1)鉴定或辅助鉴定牛C型流感病毒；
(b2)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有牛C型流感病毒。
4.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物对；
优选的，所述试剂盒的用途如下：
(b1)鉴定或辅助鉴定牛C型流感病毒；
(b2)鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有牛C型流感病毒。
5.如权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性标准质粒。
6.如权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述阳性标准质粒为由牛C型流感病毒的HE基因(GenBank登录号：MH348116.1)与载体相连后得到的重组质粒。
7.一种鉴定或辅助鉴定牛C型流感病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，采用所述引物对进行荧光定量PCR；
如果显示阳性扩增曲线、待测病毒为候选的牛C型流感病毒，如果不满足上述条件、待测病毒为候选的非牛C型流感病毒。
8.一种鉴定或辅助鉴定待测样本中是否含有牛C型流感病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：以待测样本的cDNA为模板，采用所述引物对进行荧光定量PCR；
如果均显示阳性扩增曲线、待测样本疑似含有牛C型流感病毒，如果不满足上述条件、待测样本疑似不含有牛C型流感病毒。
9.权利要求7或8所述方法，其特征在于，荧光定量PCR的反应程序包括：预变性：95℃3min；PCR反应：95℃5s，60℃15s，40个循环；融解：95℃5s，60℃1min，95℃，1个循环。
10.如权利要求7或8所述方法，其特征在于，荧光定量PCR的反应体系包括：2X TalentqPCR PreMix、引物F1 0.8μL、引物R1 0.8μL、cDNA模板2μL，加RNase-Free ddH2O至20μl；
优选的，荧光定量PCR采用SYBR GreenⅠ染料。
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