[发明专利]一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用，属于生物工程和分子检测技术领域。所述引物对由引物F1和引物R1组成。采用本发明提供的引物对、试剂盒进行检测，检测方法简便快捷，重复性好，敏感度高，特异性强，可以实现大通量样品的检测，从而实现对牛C型流感病毒进行快速的、高敏感度的实时荧光定量PCR检测；便于基层操作和应用，对于牛C型流感病毒疫病诊断和流行病学调查具有重大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物工程和分子检测技术领域，具体涉及一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

流感病毒属于正黏病毒科的成员，是一种单链负义RNA病毒。流感病毒依据序列差异和抗原性不同可以分为A、B、C、D四型。流感病毒对畜牧业和公共卫生安全均构成重要威胁，近百年来曾在全球引发四次流感大流行，对经济社会发展和公众健康造成严重危害。C型流感病毒作为流感病毒的一种，与A、B型流感病毒的基因组均由8个基因节段组成不同，C型流感病毒的基因组由7个基因组成，分别是PB2、PB1、P3、HE、NP、MP和NS组成，分别编码PB2、PB1、P3、HE、NP、M1、CM2、NS1和NS2九种病毒蛋白；其中HE基因是C型流感病毒的抗原基因，编码病毒表面唯一的糖蛋白HE蛋白，是区分C型流感病毒和D型流感病毒的关键基因。

A、B、C、D四型流感病毒均可以感染人。其中A型流感病毒和B型流感病毒是人类季节性流感病毒的主要成员，每年在全世界都会引发30万-50万人死亡，对公共卫生安全构成严重威胁，受到重点关注；研究表明，人季节性A型流感病毒最初是由动物流感病毒跨种传播而来，而后经过多次重配，目前形成H1N1和H3N2两种主要亚型。牛作为D型流感病毒的自然宿主，在D型流感病毒发现之前长期被研究者所忽略。然而目前研究发现，牛不但可以感染流感病毒，而且牛群中流感流行率较高，此外，研究者还发现了人感染牛流感病毒的血清学证据，这提示我们牛流感病毒存在跨种感染人和其它动物的风险，应加强对牛流感病毒的监测和研究工作。近年来的研究发现，除了D型流感病毒可以感染牛以外，原本只在人群中流行的C型流感病毒也在牛群中被分离到，提示牛C型流感病毒有跨种感染人的风险，对公共卫生安全构成潜在威胁。因此，加强对牛C型流感病毒的监测和研究工作可以做到关口前移，从流感病毒出现的源头兽群中及时发现有跨种传播威胁的牛C型流感病毒株，增强我们防控新发流感疫情的能力。

开展对牛C型流感病毒的监测，需要建立特异、灵敏、快速的检测方法，荧光定量PCR检测方法符合这一要求。由于牛C型流感病毒基因组序列与人牛C型流感病毒存在较大差异，直接使用人牛C型流感病毒荧光定量检测引物去检测牛C型流感病毒容易发生漏检，造成假阴性的情况出现，不利于牛C型流感病毒监测工作和研究工作的开展。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用。本发明针对近年来新发现的牛C型流感病毒基因组来设计荧光定量检测引物；此外，考虑到D型流感病毒也可感染牛，而D型流感病毒的基因组组成又与牛C型流感病毒相同，因此在检测牛C型流感病毒时存在误检D型流感病毒的可能；因此本发明选择可以有效区分牛C型流感病毒和D型流感病毒的抗原基因HE基因作为靶基因来设计荧光定量检测引物，从而获得一种特异性强、灵敏度高以及重复性好的检测牛C型流感病毒的荧光定量PCR引物对及相应试剂盒，从而完成本发明。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种引物对，所述引物对由引物F1和引物R1组成。

所述引物F1为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；