[发明专利]一种间充质干细胞旁分泌因子在制备疼痛药中的应用

说明书

一种间充质干细胞旁分泌因子在制备疼痛药中的应用，涉及生物干细胞技术领域在疼痛中的应用。本发明一方面提供了间充质干细胞旁分泌因子的制备方法；另一方面，本发明发现这种方法制备的旁分泌因子可以用于各种疼痛的治疗，具体疼痛包括关节痛、炎性疼痛、癌症疼痛等一切患者主观感觉的疼痛，具有制备疼痛药物的应用前景。本发明能够有效缓解各种原因导致的疼痛。本发明的细胞蛋白制剂在治疗疼痛方面呈现优异的生物学效果。

技术领域

本发明涉及生物干细胞技术领域在疼痛中的应用，具体涉及一种用于治疗各种疼痛的间充质干细胞旁分泌因子的制备方法及其应用。

背景技术

疼痛是组织损伤或潜在组织损伤所引起的不愉快感觉和情感体验，是一种主观感受。疼痛和人体呼吸、血压、脉搏、体温四大生命体征一起被列入第五大生命体征。已知，可使用一些按摩、红外等理疗的方法，或者使用抗炎、镇痛药物来改善和治疗疼痛。理疗的方法只能短暂的缓解症状，而药物镇痛不仅产生依赖，而且具有较大的副作用，以上这些方式均无法较长期的改善疼痛症状。

间充质干细胞是一类存在于多种组织(如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等)，具有多向分化潜力，非造血干细胞的成体干细胞。这类干细胞具有向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列细胞分化的潜能，并具有独特的细胞因子分泌功能。目前，间充质干细胞移植已经成功应用于包括神经系统、消化系统、免疫系统等多个系统的疾病治疗。

近年来，间充质干细胞已经作为生物制药成功应用于膝关节疾病的治疗，但治疗目的均以增强和改善膝关节活动为主，或以再生膝关节软骨细胞为目的，以治疗疼痛为目的的没有人提出。另外，在间充质干细胞对于疼痛治疗的领域尚属于空白，没有人发现其具备抗疼痛的功能。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的不足，首先提供了一种更多获取间充质干细胞旁分泌因子的方法，其次，提供了间充质干细胞旁分泌因子在用于制备治疗疼痛药物中的应用。其中间充质干细胞包括了脐带、脐带血、脂肪、骨髓、羊膜等所有哺乳动物尤其人来源培养获取的间充质干细胞。该间充质干细胞为自体或者同种异体来源的间充质干细胞。

不同组织来源的间充质干细胞组织处理方法不同，但从原代细胞培养后的方法均相同。

本发明以脐带间充质干细胞的获取方法为例，阐述间充质干细胞旁分泌因子的制备方法，包括以下步骤：

(1)取足月健康胎儿脐带，检测脐带血清HbsAg、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV-1/2、HCV-RNA、HIV-1-RNA、CMV-DNA，检测结果均为阴性，可用；

(2)将生理盐水瓶用喷有酒精的纱布擦拭一遍后，去除瓶口处的封口塑料放入处于运行状态的洁净台中；

(3)脐带华通氏胶的剥离并洗涤；

优选:在生理盐水中洗涤去除脐带血渍，然后浸泡酒精消毒，再次用生理盐水洗涤，在装有生理盐水的培养皿中将将脐带剪成2-3cm小段，并用生理盐水洗涤清除脐带小段血管中的淤血和凝块；然后剥离华通氏胶，用生理盐水进行洗涤；

(4)组织块制备

剪切脐带华通氏胶：将步骤(3)洗涤后的脐带华通氏胶剪切成1-4mm的组织匀浆；用生理盐水洗涤组织匀浆，进行离心；

(5)接种

将步骤(4)离心后的组织匀浆去除上清后，接种到接种培养瓶如T150中，并平铺到整个接种培养瓶底面；

(6)脐带华通氏胶的培养