[发明专利]一种波棱瓜种子DNA提取液、提取试剂盒及其应用和提取方法有效
| 申请号： | 201911028306.7 | 申请日： | 2019-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN110592077B | 公开（公告）日： | 2020-08-07 |
| 发明（设计）人： | 孟丽华;陈珠庆;李婷 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 王术娜 |
| 地址： | 650500 云南省*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 波棱瓜 种子 dna 提取 试剂盒 及其 应用 方法 | ||
1.一种波棱瓜种子DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将波棱瓜种子用液氮研磨后的粉末与65℃预热的所述DNA提取液混合后，65℃水浴35min，得匀浆；所述DNA提取液中包括：100mmol/L的Tris-HCl，24mmol/L的EDTA和质量体积比为2.4％的SDS；所述Tris-HCl的pH值为8.0；
(2)将所述匀浆与混合液等体积混合后，静置8min，4℃14000rpm离心10min；所述混合液包括体积比为24：1的氯仿和异戊醇；
(3)将步骤(2)所述离心后的上清液与所述混合液混合，静置8min，4℃14000rpm离心10min；
(4)将步骤(3)所述离心后的上清液与无水乙醇混合后，静置15min，4℃8000rpm离心10min，弃上清；
(5)将步骤(4)所述离心后得到的沉淀与体积比为70％的乙醇混合洗涤，4℃12000rpm离心4min，弃上清；
(6)将步骤(5)所述离心后得到的沉淀晾干，与8mM NaOH溶液混合后，溶解8～12h，用TE缓冲液调pH至7～8。
2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤(1)所述粉末与DNA提取液的质量体积比为0.04g：700μL。
3.根据权利要求1或2所述提取方法，其特征在于，在步骤(1)中所述水浴过程中，每隔10min进行一次颠倒混匀。
4.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤(5)所述洗涤进行2次。
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