[发明专利]一种波棱瓜种子DNA提取液、提取试剂盒及其应用和提取方法

说明书

本发明提供了一种波棱瓜种子DNA提取液、提取试剂盒及其应用和提取方法，涉及DNA提取技术领域。本发明所述DNA提取液中包括：100mmol/L的Tris‑HCl，24mmol/L的EDTA和质量体积比为2.4％的SDS；所述Tris‑HCl的pH值为8.0。本发明所述DNA提取液、提取试剂盒和提取方法可用于提取脂肪含量高的波棱瓜种子DNA，且提取得到的DNA纯度高，条带均一且不拖带，还具有成本低的优点。

技术领域

本发明属于DNA提取技术领域，具体涉及一种波棱瓜种子DNA提取液、提取试剂盒及其应用和提取方法。

背景技术

波棱瓜(Herpetospermum pedunculosum)是葫芦科Cueurbitaceae波棱瓜属Herpetospermum植物，生长于海拔2300～3000m的高寒山区，主要分布在我国西藏、云南、四川，在印度、尼泊尔也有分布。该物种因其在肝、胆等疾病的治疗上具有重要的药用价值，在藏药中被大量使用。

对波棱瓜进行组学研究时，提取其种子基因组DNA是必要的步骤之一。目前公开了许多其他植物组织基因组DNA的提取方法，但这些方法多针对于多酚、多糖含量较高的植物组织材料的DNA提取，对油脂含量高的波棱瓜种子DNA的提取不适用，提取所得DNA纯度低，且DNA电泳无条带。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种波棱瓜种子DNA提取液、提取试剂盒及其应用和提取方法，提取到的DNA纯度较高，电泳条带均一无拖尾，且成本较低。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种波棱瓜种子DNA提取液，所述DNA提取液中包括：100mmol/L的Tris-HCl，24mmol/L的EDTA和质量体积比为2.4％的SDS；所述Tris-HCl的pH值为8.0。

本发明还提供了一种波棱瓜种子DNA提取试剂盒，包括所述DNA提取液。

本发明还提供了所述DNA提取液或所述DNA提取试剂盒在提取波棱瓜种子DNA中的应用。

本发明还提供了一种波棱瓜种子DNA的提取方法，包括以下步骤：

(1)将波棱瓜种子用液氮研磨后的粉末与65℃预热的所述DNA提取液混合后，65℃水浴35min，得匀浆；

(2)将所述匀浆与混合液等体积混合后，静置8min，4℃14000rpm离心10min；所述混合液包括体积比为24：1的氯仿和异戊醇；

(3)将步骤(2)所述离心后的上清液与所述混合液混合，静置8min，4℃14000rpm离心10min；

(4)将步骤(3)所述离心后的上清液与无水乙醇混合后，静置15min，4℃8000rpm离心10min，弃上清；

(5)将步骤(4)所述离心后得到的沉淀与体积比为70％的乙醇混合洗涤，4℃12000rpm离心4min，弃上清；

(6)将步骤(5)所述离心后得到的沉淀晾干，与8mM NaOH溶液混合后，溶解8～12h，用TE缓冲液调pH至7～8。

优选的，步骤(1)所述粉末与DNA提取液的质量体积比为0.04g：700μL。

优选的，在步骤(1)中所述水浴过程中，每隔10min进行一次颠倒混匀。

优选的，步骤(5)所述洗涤进行2次。

本发明提供了一种波棱瓜种子DNA提取液，通过对提取液的浓度配比进行改良，使得对波棱瓜DNA提取效率更高，可将其制备成波棱瓜DNA提取试剂盒。