[发明专利]一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法在审
| 申请号： | 201911030413.3 | 申请日： | 2019-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN110564620A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 余丹;黄小丽;邹成义;李斌;屈东;邓卉;汪林书;刘进远;陈瑾;杨加豹 | 申请（专利权）人： | 四川省畜牧科学研究院 |
| 主分类号： | C12N1/00 | 分类号： | C12N1/00;C12N9/02 |
| 代理公司： | 51226 成都希盛知识产权代理有限公司 | 代理人： | 蒲敏 |
| 地址： | 610066 *** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 降解菌 芥子碱 多酚氧化酶 脑心浸液琼脂 培养基 接种 多酚氧化酶活性 复苏 产酶培养基 振荡培养箱 单个菌落 技术参考 酶学性质 培养条件 有效刺激 振荡培养 作用机理 产酶 可控 分泌 研究 | ||
1.一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)芥子碱降解菌的复苏培养
芥子碱降解菌的复苏培养采用以下4种中的任意1种脑心浸液琼脂培养基：
①牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；胰蛋白胨10.0～15.0g；蔗糖0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5；
②牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；胰蛋白胨10.0～15.0g；葡萄糖0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5；
③牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；大豆蛋白胨10.0～15.0g；葡萄糖0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5；
④牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；大豆蛋白胨10.0～15.0g；淀粉0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5；
将芥子碱降解菌接种于上述脑心浸液琼脂培养基中，25～30℃条件下，培养12～96小时；
2)芥子碱降解菌产酶培养
芥子碱降解菌产酶培养基组成：NaNO3：3.0g；K2HPO4：1.0g；MgSO4·7H2O：0.5g；KCl：0.5g；FeSO4：0.01g；胰蛋白胨：10.0～15.0g；蔗糖0.5～2.0g；芥子碱：0.4～0.8g；CuSO4：0.2～1.0g；水：1000mL；调pH至7～7.5，从脑心浸液琼脂复苏培养基中挑取单个菌落接种于产酶培养基中，在25～30℃振荡培养箱中振荡培养4～6天。
2.根据权利要求1所述的一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，其特征在于：步骤1)所述芥子碱降解菌采用CN104845918B所公开的方法得到的芥子碱降解菌。
3.根据权利要求1所述的一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，其特征在于：步骤2)后还有步骤3)芥子碱降解菌酶蛋白的提取
取培养4～6天后的培养液30ml，在3000r/min的条件下离心5～10分钟，彻底移除上清液，加入10mLPBS，在高速离心机中4℃、12000r/min的条件下离心15～20分钟，收集离心后的上清液，将上清液保存于-20℃冰箱中备用。
4.根据权利要求3所述的一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，其特征在于：步骤3)后还有步骤4)多酚氧化酶活性测定
将上清液在常温下解冻后，采用多酚氧化酶活性测定试剂盒测定酶活。
5.根据权利要求1所述的一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，其特征在于：步骤2)所述芥子碱采用纯度大于95％的芥子碱硫氰酸盐产品，其芥子碱含量大于85％。
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