[发明专利]一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法

说明书

本发明提供一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法。一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，该方法包括以下步骤：1)将芥子碱降解菌接种于脑心浸液琼脂培养基中，25～30℃条件下，培养12～96小时；2)从脑心浸液琼脂复苏培养基中挑取单个菌落接种于产酶培养基中，在25～30℃振荡培养箱中振荡培养4～6天。本发明方法培养条件简单可控，复苏和产酶效果好；可以有效刺激芥子碱降解菌的多酚氧化酶分泌量和显著提高多酚氧化酶活性，从而为进一步研究芥子碱降解菌的酶学性质和作用机理提供技术参考。

技术领域

本发明涉及一种微生物降解，特别是涉及一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法。

背景技术

芥子碱是菜籽粕等十字花科类植物性饲料资源中最重要的一种抗营养因子之一，其主要有以下有害作用：1)在肠道微生物的作用下，被降解为三甲胺，使动物产生鱼腥味综合征，影响动物健康，降低畜产品品质；2)味道苦涩、影响饲料适口性和动物采食量；3)能与蛋白质、微量元素等结合降低它们的消化利用率；4)具有抗雄激素作用，影响动物繁殖性能。芥子碱降解菌是指具有芥子碱降解功能的一类微生物，它们可以利用自身分泌的生物酶有效降解芥子碱。多酚氧化酶是参与芥子碱降解的主要酶类。

CN105087511A公开了一种真菌发酵法制备多酚氧化酶的培养基及其制备方法，虽然该方法的目的也是制备多酚氧化酶，但其采用的是一种真菌类冠突散囊菌，其复苏培养基为马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基，产酶培养基主要成分为麸皮、茶叶、蛋白胨和无机盐，生产的多酚氧化酶主要是针对茶多酚。CN104845918B公开了一种产蛋鸡肠道内源性芥子碱降解菌分离培养方法，该发明是筛选具有芥子碱降解功能的菌株，推荐的培养基组成和培养参数并不能保证多酚氧化酶具有较高活力。CN109593672A公开了一种一株假交替单胞菌属多糖降解菌及其培养方法与应用，CN109385455A公开了一种降解小麦秸秆半纤维素的黄孢原毛平革菌的应用方法。以上两件发明公开的虽然也属于微生物降解特定物质，但前者是以降解多糖为目标，或者是以降解半纤维素为目标。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：一种芥子碱降解菌产多酚氧化酶的培养方法，该方法包括以下步骤：

1)芥子碱降解菌的复苏培养

芥子碱降解菌的复苏培养采用以下4种中的任意1种脑心浸液琼脂(BHI)培养基：

①牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；胰蛋白胨10.0～15.0g；蔗糖0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5。

②牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；胰蛋白胨10.0～15.0g；葡萄糖0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5。

③牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；大豆蛋白胨10.0～15.0g；葡萄糖0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5。

④牛脑：200.0～250.0g；牛心浸出汁：200.0～250.0g；大豆蛋白胨10.0～15.0g；淀粉0.5～2.0g；NaCl：2.0～7.0g；琼脂：10.0～30.0g；蒸馏水：1000ml，调整培养基的pH为7.0～7.5。

使用平板划线法，将分离培养并保存的芥子碱降解菌接种于上述脑心浸液琼脂(BHI)培养基中，25～30℃条件下，培养12～96小时；所述芥子碱降解菌可采用CN104845918B所公开的方法得到的芥子碱降解菌。