[发明专利]一种茶树炭疽病菌Colletotrichum siamense的检测方法在审
| 申请号： | 201911035040.9 | 申请日： | 2019-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN110734921A | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 刘守安;何胜男;魏毅;张世宏 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 22201 长春吉大专利代理有限责任公司 | 代理人： | 姜姗姗 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病原菌 扩增基因组DNA 荧光定量PCR 致病性差异 基因组DNA 变化监控 茶树品种 茶树叶片 寄主植物 抗性筛选 炭疽病菌 序列比对 检测 茶树 茶区 扩增 判定 监控 | ||
1.一种编码Colletotrichum siamense GAPDH的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，序列长度为73bp，命名为CsiaGAPDH，Colletotrichum siamense GAPDH蛋白属于3-磷酸甘油醛脱氢酶。
2.一种扩增所述的Colletotrichum siamense GAPDH基因的特异性引物，其特征在于：命名为CsiaGAPDH-F和CsiaGAPDH-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。
3.一种从茶树中克隆得到18SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，其特征在于：命名为Cs18SrDNA1，序列长度为162bp。
4.一种扩增所述的18SrDNA特异性引物，其特征在于：命名为Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。
5.一种茶树炭疽病菌Colletotrichum siamense的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤一、提取茶树叶片的基因组DNA，所述的茶树叶片为发病叶片或不发病叶片；
步骤二、用所述的引物CsiaGAPDH-F和CsiaGAPDH-R通过荧光定量PCR的方法扩增步骤一中得到的基因组DNA，得到Ct值，计算2-ΔCt值；
步骤三、用所述的引物Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R通过荧光定量PCR的方法扩增步骤一中得到的基因组DNA，得到Ct值，计算2-ΔCt值；
步骤四、步骤二中得到的2-ΔCt(CsiaGAPDH)值为分子，步骤三中得到的2-ΔCt(Cs18SrDNA1)的值为分母，若比值为0，则未检测到该病原菌；若比值大于0，则表明茶树已感染该病原菌；根据比值的大小，比较该病原菌致病的程度以及茶树品种抗病的差异。
6.一种茶树炭疽病菌Colletotrichum siamense的检测试剂盒，其特征在于，具体组成成分如下：试剂盒1的组成成分包括：引物Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R和定量PCR反应混合液；试剂盒2的组成成分包括：引物CsiaGAPDH-F和CsiaGAPDH-R和定量PCR反应混合液。
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