[发明专利]一种解磷菌及其提取方法

权利要求书

1.一种解磷菌，其特征在于，所述解磷菌名称为B5菌株，所述B5菌株为假单胞菌属细菌；

其生化指标测定结果为：革兰氏染色阴性，甲基红试验阴性，V-P反应阴性，吲哚试验阴性，氧化酶试验阴性，菌株B5可以利用柠檬酸盐为碳源，产生胞外酶-明胶酶液化明胶、产生过氧化氢酶、吲哚、且生成H₂S；

所述B5菌株在不同碳源下解磷能力强弱顺序为：葡萄糖＞半乳糖＞乳糖＞蔗糖＞可溶磷淀粉，在不同氮源下解磷能力顺序为硫酸铵＞氯化铵＞尿素＞硝酸钾；所述B5菌株最适生长温度为28～32℃，所述B5菌株最适生长pH为7～9。

2.一种权利要求1所述的解磷菌的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1:土壤采样：采集于新疆昌吉市室外土壤，采集地面5cm下的土壤样品；

S2：取步骤S1采集的1g土壤，研钵研碎置于含90mL无菌水的锥形瓶内，摇床28℃、170r/min震荡混匀20min，静止10min；

S3：分离与提纯：取步骤S2中的溶液1μL无菌水的离心管内，设置浓度梯度为10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，分别取1mL涂布于PVK固体培养基，每个浓度重复三次，3天后挑取周围有透明溶磷圈的菌落，在LB固体培养基上纯化5次。筛选出菌株置于30％的甘油中，-80℃冰箱中保存；

其中，PVK培养基：葡萄糖10g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，NaCl 0.2g，MgSO₄·7H₂O 0.1g，Ca₃(PO₄)₂5g，KCl 0.3g，FeSO₄·7H₂O 0.03g，MnSO₄·4H₂O 0.03g，琼脂15～20g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.5，120℃灭菌20min；

LB培养基：蛋白胨10g、NaCl 10g、酵母5g，蒸馏水1000mL，pH值为6.8～7，121℃灭菌20min；

S4：菌株的鉴定：将步骤S3筛选出的菌株接种于NBRIP固体培养基内，32℃下倒置培养7天后，获得四株溶磷圈大而显著的菌株，菌株编号为A14、A12、B5、C5；

其中，NBRIP培养基：葡萄糖10g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，NaCl 0.2g，MgSO₄·7H₂O 0.1g，Ca₃(PO₄)₂ 5g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.5，120℃灭菌20min；

S5：采用钼蓝比色法对A14、A12、B5、C5进行解磷能力的确定，选择出解磷能力最强的菌株B5。

3.根据权利要求2所述的解磷菌的提取方法，其特征在于，步骤S5具体为将步骤S4筛选出来的A14、A12、B5、C5菌株在NB液体培养基中，培养24h后，取0.5mL菌液于含50mL Ca₃(PO₄)₂的NBRIP液体培养基中，32℃170r/min的条件下培养7天，每24h取三角瓶中的培养液1mL，超声波震碎细胞后，10000r/min条件下离心2min，采用钼蓝比色法测定有效磷的含量，选择出有效磷含量最多的菌株B5。