[发明专利]西伯利亚鲟全长脂联素蛋白基因原核表达的方法及应用在审
| 申请号： | 201911035632.0 | 申请日： | 2019-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN110684793A | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 李志琼;唐妮;徐少奇;李娅;刘晏伶;王美;陈虎;汪斌;田正志;张鑫;周朝伟;陈德芳;王艳;杨淞;赵柳兰 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/11;C12N15/12;C07K14/46;G01N33/68;A23K50/80;A23K20/147 |
| 代理公司： | 51229 成都正华专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 李蕊 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脂联素 西伯利亚 重组质粒 低成本生产 蛋白基因 功能验证 诱导表达 原核表达 原核生物 注射试验 成熟肽 构建 可用 添加剂 蛋白 克隆 应用 | ||
1.一种西伯利亚鲟全长脂联素蛋白基因原核表达的方法，其特征在于，包括：
(1)成熟肽基因的克隆：根据全长脂联素蛋白的氨基酸序列，设计分别带有BamHI酶切位点和HindⅢ酶切位点的上下游引物，进行PCR扩增，得到目的核苷酸片段；
(2)重组质粒的构建：将原核表达载体与目的核苷酸片段进行重组，构成能表达出氨基酸序列的重组质粒；
(3)重组质粒诱导表达：将重组质粒导入表达菌株中，并利用诱导剂诱导重组质粒在表达菌株中表达。
2.根据权利要求1所述的西伯利亚鲟全长脂联素蛋白基因原核表达的方法，其特征在于：所述(3)中表达菌株为E.coli BL21，诱导剂为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷。
3.根据权利要求2所述的西伯利亚鲟全长脂联素蛋白基因原核表达的方法，其特征在于：将重组质粒转化到表达菌株E.coli BL21中，在37℃，200rpm/min条件下于含氨苄霉素的液体LB培养基中培养至OD600值达0.4～0.6，再添加异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导培养，使重组质粒在表达菌株中表达。
4.根据权利要求3所述的西伯利亚鲟全长脂联素蛋白基因原核表达的方法，其特征在于：诱导培养的条件为：温度为37℃，诱导剂浓度为1.0-1.2mmol/L，诱导时间为6h。
5.权利要求1-4中任一项所述的方法在蛋白功能试验或制备添加剂中的应用。
6.用于权利要求1-4中任一项所述的方法中的上下游引物，其特征在于，具体为：
上游引物：5'-GCGGATCCCAGGAGGAGGGTGAA-3'；
下游引物：5'-GGAAGCTTGCGATCTCCGTTTACTGT-3'。
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