[发明专利]一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白

说明书

本发明涉及一种包含NT‑proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白进行制备、应用等方面的研究。所述结合蛋白活性强，与NT‑proBNP具有较高的亲和力，能够实现对NT‑proBNP的高效检测，从而为心力衰竭的早期诊断提供依据。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学技术领域，尤其是涉及一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其应用。

背景技术

脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)，一种具有强有力的利尿、扩血管和降压作用的多肽类激素。BNP在心脏含量最高，由心室分泌，心肌细胞首先合成的是含有108个氨基酸的proBNP(BNP前体)，当心肌细胞受到刺激后，proBNP在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的氨基末端B型利钠肽原(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、具有活性的B型利钠肽(BNP)，两者等摩尔分泌释放进入血循环。

目前认为，脑钠肽(BNP)和脑钠肽原N端肽(NT-proBNP)是判断心力衰竭的生物标志物，当心脏容量负荷增加或心脏功能受损时，氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)与BNP的指标浓度会异常升高。而NT-proBNP相对BNP生物稳定性较好，半衰期较长(120min)，浓度相对较稳定，有效检测时间长，血液中含量相对比BNP高约16～20倍，因此检测相对容易，并且血浆标本在体外的稳定性长(48h)，因而NT-proBNP是诊断心力衰竭和评价心脏功能的最佳心肌标志物。

随着生活条件的提高和社会老龄化的加剧，心力衰竭病人数量逐年增加，心力衰竭的早期诊断是当今医疗保健面临的最关键的问题。在发现一些相关早期病症的时候，准确、灵敏、高效、稳定地测定血液中NT-proBNP的量，能给早期心功能不全、心衰、呼吸困难的心源性及非心源性心衰治疗及预后监测，急性冠状动脉综合征的分级等方面提供快速、准确的早期诊断依据。

目前用于检测NT-proBNP含量的方法主要有金标定性试验、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光法(CMIA)，这些测量方法都需要使用与NT-proBNP特异性结合的蛋白。长期以来，杂交瘤技术生产的鼠单克隆抗体被广泛的应用于科研、临床诊断和治疗，但由于杂交瘤方式生产需采用小鼠腹腔诱生，受小鼠个体影响大，生产不稳定、批间差异大、含小鼠自身抗体纯化难度大，而本发明涉及的结合蛋白采用重组技术，可完全解决上述问题。目前常用的NT-proBNP结合蛋白存在活性差、亲和力低等问题，无法较好的应用于NT-proBNP的检测，因此本领域对于活性好、亲和力高的NT-proBNP结合蛋白具有强烈的需求。

鉴于上述技术问题，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对其进行制备、应用等方面的研究。

所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性；

互补决定区CDR-VH1为G-Y-X1-F-T-X2-Y-Y-I-X3，其中，X1是F、V或T，X2是E或D，X3是Q、H或N；

互补决定区CDR-VH2为W-I-X1-P-E-X2-F-N-X3-E-Y-N-E-X4-F-K-G，其中，

X1是Q、H或N，X2是E或D，X3是I、V或L，X4是K或R；

互补决定区CDR-VH3为A-X1-D-X2-D-W-X3-G-D，其中，

X1是R或K，X2是P、A或G，X3是D或E；

互补决定区CDR-VL1为R-X1-S-Q-S-X2-X3-H-X4-N-G-N-T-Y-L-H，其中，

X1是S或T，X2是I或L，X3是L、V或I，X4是R或K；