[发明专利]一种海参皂苷Cladoloside A的提取方法

说明书

本发明公开了一种海参皂苷Cladoloside A的提取方法，属于生物分离技术领域。本发明将仿刺参体壁通过乙醇水溶液进行浸提，浓缩液采用AB‑8大孔树脂进行富集分离，收集浸膏，得海参皂苷粗提物。利用正反向硅胶柱进行分离纯化，得到纯品，通过核磁共振波谱进行结构分析鉴定，确定为化合物Cladoloside A。本发明提取方法简便、快捷、高效、绿色，能得到纯度较高的海参皂苷Cladoloside A，且该化合物从仿刺参首次提取，为进一步探索海参皂苷Cladoloside A的药理活性奠定了基础，对深入研究仿刺参中海参皂苷的生理合成具有科学意义。

技术领域

本发明涉及一种海参皂苷Cladoloside A的提取方法，属于生物分离技术领域。

背景技术

海参皂苷是仿刺参的主要活性成分，在仿刺参的体壁、肌肉、肠道、呼吸树、体腔液等任何部位都有分布，但各个部分海参皂苷的种类和含量不同。仿刺参体壁中海参皂苷含量较高，具有抗真菌、抗肿瘤、抗凝血等活性，药用和保健价值被越来越多的人所认可。因此，海参皂苷的药理活性受到广泛关注。目前，国内外学者发现并确定结构的海参皂苷有100多种，其苷元多数具有羊毛甾醇的基本骨架，但未发现从仿刺参体壁提取海参皂苷Cladoloside A的相关报道。

目前，国内对海参总皂苷的提取比较多，而对海参皂苷单体的提取相对比较少，技术难度较高，不易得到纯度较高的单体化合物，很难进行进一步的药理活性研究。本发明提供一种从仿刺参体壁分离得到海参皂苷Cladoloside A的方法。

发明内容

本发明提供了一种海参皂苷Cladoloside A的提取方法，能够简单、高效、快速提纯海参皂苷Cladoloside A，包括如下步骤：

(1)选取新鲜仿刺参经解剖去内脏后粉碎，得到仿刺参糜肉，加入80％的乙醇水溶液进行回流提取，提取3次，提取液趁热过滤，收集滤液进行浓缩回收，得浓缩浸膏为总提取物；

(2)将步骤(1)中得到的总提取物，均匀分散在水中，过大孔树脂柱进行梯度洗脱，洗脱顺序为水，80％乙醇，经薄层色谱分析，收集80％乙醇的洗脱液；

(3)将步骤(2)中得到的80％乙醇洗脱液回收，进行浓缩，得海参总皂苷提取物；

(4)将步骤(3)中得到的海参总皂苷提取物通过正向硅胶柱，用不同比例的氯仿、甲醇和水做为洗脱溶剂进行梯度洗脱，洗脱液经过薄层色谱分析，选取含量大的部分进一步通过两次反向硅胶柱层析进行分离纯化，浓缩后最终得到无色结晶性粉末，该粉末即为海参皂苷Cladoloside A。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(1)中仿刺参糜肉与80％乙醇水溶液的质量比为1：7，提取的时间分别为2小时、1.5小时和0.5小时，滤液浓缩的方式为真空旋转浓缩，浓缩的温度为40℃。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(2)中大孔树脂层析柱中的大孔树脂填料的粒度为0.3-1.25mm。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(2)中总提取物与大孔树脂的质量比为1：7-1：8。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(2)中大孔树脂洗脱中的洗脱溶剂为大孔树脂质量的6-7倍，洗脱流速为每小时1个柱床体积。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(2)中薄层色谱展开剂为氯仿、甲醇和乙酸乙酯，体积比为9：3：2；步骤(4)中薄层色谱展开剂为氯仿、甲醇和水，体积比为4：1：0.1。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(3)和步骤(4)中浓缩的方式均为真空旋转浓缩，浓缩的温度均为40℃。

进一步地，上述技术方案中，所述步骤(4)中氯仿：甲醇：水的体积比依次为10:1:0.1、9:1:0.1、4.5:1:0.1、4:1:0.1、3:1:0.1、2:1:0.1、1:1:0.1。