[发明专利]一种构树茎段诱导体胚发生的方法

权利要求书

1.一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）外植体制备：取构树植株的嫩梢为材料，经过修剪、消毒洗涤，得到构树茎段；在超净工作台上，去掉茎段上粗壮的幼苗顶端和根部后，将茎段切成 0.3~0.5 cm作为外植体，每个外植体均不带芽点；

（2）胚性愈伤组织的诱导：将切好的外植体接种于构树胚性愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，培养15天后更换一次培养基，30天后得到增殖后的愈伤组织；其中，所述的构树胚性愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加浓度为0.05~0.08 mg·L^-1的TDZ、浓度为0.8~1.0 mg·L^-1 的NAA、浓度为0.08~0.1 mg·L^-1的2,4-D、浓度为25~30g·L^-1的蔗糖和浓度为6.0~6.5 g·L^-1的卡拉胶；

（3）体胚的诱导：挑选长势较好的胚性愈伤组织转接到体胚诱导培养基上，进行体胚的诱导，30天后得到构树体细胞胚；其中，所述的体胚诱导培养基以MS培养基为基础培养基，并添加浓度为0.08~0.1 mg·L^-1 的NAA、浓度为1.0~1.2 mg·L^-1 的6-BA、浓度为25~30g·L^-1的蔗糖和浓度为6.0~6.5 g·L^-1的卡拉胶。

2.根据权利要求1所述的一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，构树嫩梢消毒洗涤的具体过程包括：先采用70%浓度的酒精消毒40s，再用0.1%浓度的升汞溶液消毒5min，最后用无菌水冲洗5次。

3.根据权利要求1所述的一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于：所述步骤（2）中进行诱导培养的条件为温度25±2℃、光照度1500lx、光照时间16h·d^-1。

4. 根据权利要求3所述的一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于：所述构树胚性愈伤组织诱导培养基的具体配置为：每升MS培养基中，添加0.05 mg·L^-1 TDZ、1.0mg·L^-1 NAA、0.1 mg·L^-1 2,4-D、30g·L^-1蔗糖和6.5g·L^-1卡拉胶，并在121℃的温度下灭菌20 min，控制pH值为5.8。

5.根据权利要求1所述的一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于：所述步骤（3）中进行体胚的诱导的条件为温度25±2℃、光照度1500lx、光照时间16h·d^-1。

6. 根据权利要求5所述的一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于：所述体胚诱导培养基的具体配置为：每升MS培养基中并添加0.1 mg·L^-1 NAA、1.0 mg·L^-1 6-BA、30g·L^-1蔗糖和6.5g·L^-1卡拉胶，并在121℃的温度下灭菌20 min，控制pH值为5.8。