[发明专利]一种构树茎段诱导体胚发生的方法

说明书

本发明公开了一种构树茎段诱导体胚发生的方法，具体包括：（1）外植体制备；（2）胚性愈伤组织的诱导；（3）体胚的诱导；以构树幼嫩茎段为材料，建立构树胚性愈伤组织诱导和体胚发生技术途径，有效解决了构树胚性愈伤组织诱导率低、体胚诱导难的问题。本发明培养基和培养方法效果好，具有胚性愈伤组织诱导率高、质量高、培养周期相对较短的优点，为构树良种的快速繁殖提供了一种高效途径，对于加速构树优良材料的繁育，缓解社会对构树苗木的紧迫需求具有重要意义。同时，将本发明培养基及培养方法应用于构树遗传育种中，可缩短育种周期，为构树的品种改良提高重要的技术平台。

技术领域

本发明属于构树育苗方法技术领域，具体涉及一种构树茎段诱导体胚发生的方法。

背景技术

构树（Broussonetia papyrifera）为桑科（Moreceae）构树属（Broussonetia）落叶乔木或灌木，分布于我国除东北北部、西北北部以外的大部分地区。构树适应性极强，是优良的生态绿化树种，同时可作为造纸和加工青储饲料等的原材料，发展前景广阔。

目前，构树种苗繁育的主要依靠传统扦插方式，很难满足市场对构树种苗的需求，限制了其良种的大规模推广。利用植物组织培养方法实现离体器官再生，可较好的解决优良种苗的大规模高效繁殖和商业化生产的问题。特别是通过植物体细胞胚再生途径生产种苗，具有繁殖系数高、遗传稳定等优点，还可为林木分子育种搭建平台。目前，已有学者对构树组织培养技术进行研究，但关于构树细胞胚的研究尚少，仅见张朝晖等以杂交构树叶片为材料，对影响构树体细胞胚发生的因素进行了初步探讨。但是目前以构树无菌苗茎段为材料，建立愈伤组织诱导及体胚发生技术途径尚未见有报道，这是对前人研究从构树叶片获得体胚发生的补充和突破，为构树的良种繁育及进一步遗传改良奠定基础。

发明内容

本发明目的是针对现有技术中构树胚性愈伤组织诱导率低、体胚诱导难的问题，提供一种构树茎段诱导体胚发生的方法，以构树无菌苗茎段为材料，建立愈伤组织诱导及体胚发生技术途径，为构树的良种繁育及进一步遗传改良奠定基础。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种构树茎段诱导体胚发生的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）外植体制备：取构树植株的嫩梢为材料，经过修剪、消毒洗涤，得到构树茎段；在超净工作台上，去掉茎段上粗壮的幼苗顶端和根部后，将茎段切成 0.3~0.5 cm作为外植体，每个外植体均不带芽点；

（2）胚性愈伤组织的诱导：将切好的外植体接种于构树胚性愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，培养15天后更换一次培养基，30天后得到增殖后的愈伤组织；其中，所述的构树胚性愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加浓度为0.05~0.08 mg·L^-1的TDZ、浓度为0.8~1.0 mg·L^-1 的NAA、浓度为0.08~0.1 mg·L^-1的2,4-D、浓度为25~30g·L^-1的蔗糖和浓度为6.0~6.5 g·L^-1的卡拉胶；

（3）体胚的诱导：挑选长势较好的胚性愈伤组织转接到体胚诱导培养基上，进行体胚的诱导，30天后得到构树体细胞胚；其中，所述的体胚诱导培养基以MS培养基为基础培养基，并添加浓度为0.08~0.1 mg·L^-1 的NAA、浓度为1.0~1.2 mg·L^-1 的6-BA、浓度为25~30g·L^-1的蔗糖和浓度为6.0~6.5 g·L^-1的卡拉胶。