[发明专利]单克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种单克隆抗体的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

(1)抗原免疫动物，

(2)分离免疫后动物的脾细胞，

(3)进行细胞融合，

(4)制备阳性杂交瘤细胞，

(5)制备单克隆抗体；

其中，单克隆抗体的制备包括体外培养和体内培养；当进行体内培养时，还包括：(5-1)制备腹水抗体，

(5-2)纯化制备的腹水抗体，得到单克隆抗体；

其中，利用已知抗体在步骤(4)中进行阳性杂交瘤细胞的筛选步骤，和/或，利用已知抗体在步骤(5-1)中对腹水抗体进行筛选步骤。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)和步骤(5-1)中筛选步骤使用的方法为夹心法或竞争法。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述夹心法的包括以下步骤：

a)标记物标记已知抗体，备用；

b)将阳性杂交瘤细胞上清中的抗体或腹水抗体包被在固体支持物上，加入抗原反应完成后，加入标记物标记的已知抗体，继续反应；

c)添加反应底物并检测标记物的信号值，得到筛选的阳性杂交瘤细胞或得到筛选的腹水抗体。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述竞争法包括以下步骤：

在步骤(4)中，a)标记物标记已知抗体，备用；b)将抗原包被在固体支持物上，同时加入标记物标记的已知抗体和阳性杂交瘤细胞上清，反应完成后添加反应底物并检测标记物的信号值，根据信号值筛选阳性杂交瘤细胞；

在步骤(5-1)中，a)标记物标记已知抗体，备用；b)将抗原包被在固体支持物上，同时加入标记物标记的已知抗体和腹水抗体，反应完成后添加反应底物并检测标记物的信号值，根据信号值筛选腹水抗体；

优选地，在使用竞争法进行阳性杂交瘤细胞筛选时，标记物标记的已知抗体与阳性杂交瘤细胞上清内的抗体浓度相近或相同；在使用竞争法进行腹水抗体筛选时，标记物标记的已知抗体与腹水抗体的浓度相近或相同。

5.一种夹心法检测用单克隆抗体对的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

(1)抗原免疫动物，

(2)分离免疫后动物的脾细胞，

(3)进行细胞融合，

(4)制备阳性杂交瘤细胞，

(5)制备单克隆抗体对；

其中，单克隆抗体对的制备包括体外培养和体内培养；当进行体内培养时，还包括：

(5-1)制备腹水抗体，

(5-2)纯化制备的腹水抗体，得到单克隆抗体对；

其中，利用结合不同抗原表位的抗体A和抗体B在步骤(4)中进行阳性杂交瘤细胞的筛选步骤，和/或，利用抗原表位不同的抗体A和抗体B在步骤(5-1)中对腹水抗体进行筛选步骤。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)和步骤(5-1)中的筛选步骤使用的方法为夹心法或竞争法。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述夹心法包括以下步骤：

在步骤(4)中，a)标记物标记抗体A和抗体B，备用；b)将阳性杂交瘤细胞上清中的抗体分别包被在固体支持物1和固体支持物2上，加入抗原反应完成后，在包被的固体支持物1中加入标记物标记的抗体A，和在包被的固体支持物2中加入标记物标记的抗体B；

c)添加反应底物并检测标记物的信号值，根据信号值筛选阳性杂交瘤细胞；

在步骤(5-1)中，a)标记物标记抗体A和抗体B，备用；b)将腹水抗体分别包被在固体支持物1和固体支持物2上，接着，在包被的固体支持物1中加入标记物标记的抗体A，和在包被的固体支持物2中加入标记物标记的抗体B；c)添加反应底物并检测标记物的信号值，根据信号值筛选腹水抗体。