[发明专利]单克隆抗体的制备方法

说明书

本发明公开了一种单克隆抗体的快速制备方法、及由该方法制备的杂交瘤细胞对和单克隆抗体对。该制备方法在制备阳性杂交瘤细胞或腹水抗体时，首先使用已知的抗体进行筛选。该方法大大减小了纯化工作量，缩短了杂交瘤技术制备单克隆抗体的周期，提高了制备成功率；并且利用该方法制备得到的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性强、灵敏度高、稳定性好。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种快速地制备单克隆抗体的方法、该方法制备得到的杂交瘤细胞对及单克隆抗体对。

背景技术

免疫诊断(immunodiagnosis)是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态。免疫诊断试剂在诊断试剂盒中品种最多，广泛应用于医院、血站、体检中心，主要用于肝炎检测、性病检测、肿瘤检测、孕检等。其中，免疫诊断包括放射免疫、酶联免疫、化学发光等。酶联免疫试剂具有成本低、可大规模操作等特点；而化学发光试剂具有灵敏、快速、稳定、选择性强、重现性好、易于操作、方法灵活多样的优点。

免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。随着学科间的相互渗透，免疫学涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。免疫学方法的应用范围亦在日益扩大，不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法，也为众多学科的研究提供了方便。在医学上，它是确定疾病的病因和病变部位，或是确定机体免疫状态是否正常的重要方法。

免疫检测的主要原料包括抗原、抗体，在对抗原进行检测时，检测试剂盒中需使用与抗原特异性结合的抗体。目前对于抗体的制备方法通常采用杂交瘤技术进行制备。但是，现有的杂交瘤细胞技术存在制备方法按工作量大、耗时长、成功率低等技术缺陷，因此，研发出新的筛选方法成为必然趋势。

发明内容

为解决上述问题上述现有技术问题，本发明提供了一种快速制备单克隆抗体的方法。该方法可快速并直接的筛选出单克隆抗体，并且制备得到的单克隆抗体特异性强、灵敏度高、稳定性好，可应用于快速、准确检验样本中抗原的试剂盒中。

本发明通过将单克隆筛选步骤从传统的纯化单克隆抗体后筛选提前到制备阳性杂交瘤细胞或制备腹水抗体时，减轻了复杂耗时的单克隆抗体纯化工作量。并且利用已知的抗体进行筛选工作，可以直接筛选出有效的单克隆抗体。

一方面，本发明提供了一种单克隆抗体的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

(1)抗原免疫动物，

(2)分离免疫后动物的脾细胞，

(3)进行细胞融合，

(4)制备阳性杂交瘤细胞，

(5)制备单克隆抗体；

其中，单克隆抗体的制备包括体外培养和体内培养；当进行体内培养时，还包括：

(5-1)制备腹水抗体，

(5-2)纯化制备的腹水抗体，得到单克隆抗体；

其中，利用已知抗体在步骤(4)中进行阳性杂交瘤细胞的筛选步骤，和/或，利用已知抗体在步骤(5-1)中对腹水抗体进行筛选步骤。

在一个实施方式中，所述步骤(4)和步骤(5-1)中筛选步骤使用的方法为夹心法或竞争法。

在一个优选实施方式中，所述夹心法的包括以下步骤：

a)标记物标记已知抗体，备用；

b)将阳性杂交瘤细胞上清中的抗体或腹水抗体包被在固体支持物上，加入抗原反应完成后，加入标记物标记的已知抗体，继续反应；

添加反应底物并检测标记物的信号值，得到筛选的阳性杂交瘤细胞或得到筛选的腹水抗体。