[发明专利]一种分离培养间充质干细胞的方法

说明书

本发明提供了一种分离培养间充质干细胞的方法。本发明的方法包括高温诱导的步骤，能够缩短间充质干细胞的分离时间，提高间充质干细胞的产量，增强其增殖能力以及生物学效力。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，涉及分离培养间充质干细胞的方法，特别地，涉及利用高温诱导的方法，缩短从相应组织中分离间充质干细胞的时间，提高分离间充质干细胞的效率并增强细胞的增殖能力和治疗效力。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是来源于发育早期中胚层的一类成体干细胞，具有自我更新及多向分化潜能。

1968年，德国科学家Frieden Stein和他的同事在骨髓中发现了间充质干细胞，后来的研究者陆续发现间充质干细胞广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为包括神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞在内的多组织系统的细胞，还在造血、免疫炎症反应、血管新生等人体重要功能中起重要调节作用。由于其具有的免疫调节能力和组织修复能力，间充质干细胞具有广阔的临床应用前景，可用于治疗神经系统疾病、肝肾损伤、自身免疫疾病、心脏疾病、骨疾病、软骨疾病、缺血性血管疾病、糖尿病并发症和肿瘤等多种疾病，也可用于组织工程和面部整形中，另外还可与造血干细胞共同移植治疗血液疾病等。

鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点，正日益受到人们的关注。随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，临床研究已经在许多国家开展。作为种子细胞,临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病；作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病。

最初的临床研究是1995年由Lazarus等人进行的，他们收集缓解期血液肿瘤患者的自体MSC，在体外扩增培养4～7周，然后再静脉注射入患者体内，患者被分为3组，分别给予不同剂量的MSC，注射后没有观察到毒副作用，提示MSC用于移植治疗安全可靠。随后自体MSC的临床报道逐渐增多，病种涉及放疗及化疗后造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)、心脏系统疾病等，在这些报道中均证明临床经静脉输注安全可靠。美国NIH的Clinical Trials是全球最大的临床研究数据库，根据该数据库的检索结果，截至2017年7月12日，在该数据库登记的关于间充质干细胞的临床研究超过950项，其中，在中国、欧洲和美国开展的临床研究数目位居全球三甲。从治疗的疾病种类来看，间充质干细胞的临床研究涉及上百种疾病。将这些疾病按照器官系统分类，可以发现神经系统、心血管和骨科疾病是三类主要的研究领域，另外，糖尿病、肝脏、肺脏、胃肠道、皮肤和移植物抗宿主病也是重要的临床研究方向。

在工程化方面，从不同组织中分离出MSC并扩增培养是其生产工艺的关键环节。然而，MSC通常在生理条件下是静止的，比如，采用爬片法从脐带组织中获取MSC时，MSC分离获取周期较长，一般需要15天左右收获P0代细胞；而且在细胞体外扩增时，MSC的增殖速率会随着MSC的传代而降低，因此影响MSC的产业化。

本发明针对以上问题，提供了利用高温诱导分离培养间充质干细胞的方法，缩短了从组织中分离MSC的时间、提高了分离MSC的效率并增强了MSC在传代过程中的增殖能力和治疗效力。

发明内容

为了解决产业中MSC分离培养效率不高、周期过长的问题，本发明人旨在开发一种新的MSC分离培养方法。

本发明人意外地发现，在常规MSC分离培养方法中增加将含有MSC的组织置于高温条件下诱导的步骤，可以显著缩短MSC的分离时间和提高分离效率。更令人惊讶的是，与常规方法相比，高温诱导分离得到的MSC显示出增强的增殖能力和生物学效力。在替代实施方式中，高温条件也用于在分离后处理MSC，以提高其增殖能力和生物学效力。

因此，本发明提供了一种分离培养MSC的方法，该方法包括高温诱导的步骤。优选地，可以直接将含有MSC的组织置于高温条件下诱导，也可以在高温条件下分离后处理MSC。