[发明专利]循环肿瘤细胞阴性富集检测方法

说明书

本发明提供了一种循环肿瘤细胞阴性富集检测方法，所述循环肿瘤细胞阴性富集检测方法包括：向含有全血样本的第一离心管中加入红细胞特异性抗体和白细胞特异性抗体的组合，以使全血样本中红细胞和白细胞耦联在一起；利用密度梯度离心法去除所述全血样本中耦联在一起的红细胞和白细胞，以实现循环肿瘤细胞阴性富集。基于本发明的循环肿瘤细胞阴性富集检测方法可以有效提高单核细胞层中CTCs的纯度，从而降低后续鉴定工作的复杂程度，提高鉴定的效率和准确率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种循环肿瘤细胞阴性富集检测方法。

背景技术

循环肿瘤细胞(circulating Tumor Cells，CTCs)阴性富集检测方法是指通过剔除血液中除CTCs以外其他血细胞来达到富集血液中CTCs的目的，剔除方法主要采用的是密度梯度离心方式，即将血液与一种介质(密度梯度离心液)混合后，通过离心力使血液中细胞根据自己的密度达到分离分层的目的，经过梯密度离心的血液样本会分成4层，由上至下依次为：血浆、单核细胞、分离液 (密度梯度离心液)以及红细胞和白细胞；CTCs作为单核细胞会处于单核细胞层，所以只需再将单核细胞层提取出来，即达到了血液中CTCs的富集目的。

但是现有的CTCs阴性富集检测方法存在以下不足：

1)现有方法中CTCs阴性富集会将单核细胞层的样本全部提取出来，这一层里含有大量的白细胞，所以CTCs的富集纯度不够高，会对后续的鉴定工作增加复杂程度，影响鉴定效率和准确率；

2)CTCs阴性富集分层效果和血液样本有关，尤其是红细胞，在密度梯度离心后，有些血液样本会出现红细胞上窜，与单核细胞层无法严格区分开来，导致最终CTCs富集纯度降低，并严重干扰后续的鉴定工作；

3)在血液样本出现红细胞上窜时，通常采取裂红的方式将单核细胞层里的混入的红细胞去除掉，这样操作对其他单核细胞的完整性会产生副作用，并且因为裂红而增加了清洗步骤，使得最终细胞的回收率受影响；

4)由于CTCs阴性富集检测方法包含从血液中富集CTCs，以及后续的染色鉴定过程，流程较长，需要多个环节的清洗和更换试管，在这一完整流程中，会导致细胞的丢失，影响最终检测的灵敏度。

针对现有技术中CTCs阴性富集检测方法存在的不足，本领域技术人员一直在寻找解决的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种循环肿瘤细胞阴性富集检测方法，以解决使用现有技术中CTCs阴性富集检测方法存在的不足。

为解决上述技术问题，本发明提供一种循环肿瘤细胞阴性富集检测方法，所述循环肿瘤细胞阴性富集检测方法包括如下步骤：

S1：向含有全血样本的第一离心管中加入红细胞特异性抗体和白细胞特异性抗体的组合，以使全血样本中红细胞和白细胞耦联在一起；

S2：利用密度梯度离心法去除所述全血样本中耦联在一起的红细胞和白细胞，以实现循环肿瘤细胞阴性富集。

可选的，在所述的循环肿瘤细胞阴性富集检测方法中，执行S2具体包括如下步骤：

将所述第一离心管放在摇床上孵育；

向带有插件的第二离心管中加入密度梯度离心液，将孵育好的所述第一离心管中的全血样本转入所述第二离心管中；

将所述第二离心管放置于离心机中进行离心，离心后全血样本中单核细胞层位于所述插件上方，含有耦联在一起的红细胞和白细胞位于所述插件下方；

将进行离心后位于所述第二离心管中插件上方的样本倒入第三离心管。

可选的，在所述的循环肿瘤细胞阴性富集检测方法中，在执行S2之后，还包括如下步骤：