[发明专利]一种高浓度蒎烯耐受性产蒎烯工程菌的构建方法有效

专利信息
申请号: 201911049349.3 申请日: 2019-10-31
公开(公告)号: CN110656056B 公开(公告)日: 2021-07-27
发明(设计)人: 诸葛斌;马腾飞;宗红;陆信曜;任全路 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N1/19 分类号: C12N1/19;C12P5/00;C12R1/72
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 张勇
地址: 214000 江苏省*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 浓度 蒎烯 耐受 工程 构建 方法
【权利要求书】:

1.一种基因工程菌,以产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes) CCTCC M 93018为宿主,其特征在于,表达来源于Pinus taeda的蒎烯合酶,所述蒎烯合酶的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。

2.一种构建权利要求1所述基因工程菌的方法,其特征在于,将编码蒎烯合酶如SEQ IDNO.1所示的基因整合到产甘油假丝酵母CCTCC M 93018的基因组中。

3.根据权利要求2所述的一种方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)将SEQ ID NO.1连接到pURGAPU质粒上构建重组表达载体;

(2)线性化重组表达载体;

(3)采用醋酸锂转化法将线性化重组表达载体转化到产甘油假丝酵母CCTCC M 93018基因组中。

4.一种生产蒎烯的方法,其特征在于,是以权利要求1所述基因工程菌为发酵微生物,以葡萄糖作为碳源进行发酵。

5.根据权利要求4所述的一种方法,其特征在于,在发酵过程中需要加入正十二烷。

6.根据权利要求5所述的一种方法,其特征在于,在发酵培养基OD值达到0.8~1.2时加入正十二烷,发酵时间为48~96h。

7.权利要求1所述的基因工程菌在蒎烯工业生产中的应用。

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