[发明专利]一种鱼肉腐败菌氨基酸脱氨能力的检测方法

权利要求书

1.一种鱼肉腐败菌氨基酸脱氨能力的检测方法，其特征在于，包括：用磷酸盐缓冲液溶解待测氨基酸底物配制得到待测氨基酸的底物溶液，将含待测腐败菌的菌悬液加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为评价组，将含待测腐败菌的菌悬液加入到磷酸盐缓冲液中作为对照组，将无菌生理盐水加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为空白组，分别在相同条件下培养，随后检测得到评价组、对照组和空白组的游离氨浓度C_评价、C_对照和C_空白，计算得到腐败菌对待测氨基酸的脱氨能力；评价组、对照组和空白组的培养温度为30-35℃，培养时间为36-54h；

所述待测氨基酸的底物溶液的配制具体包括，用0.045M、pH 7.50的磷酸盐缓冲液溶解得到4.0-6.5mM的待测氨基酸的底物溶液，121℃灭菌15-20min，冷却后再加入氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，并控制氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的终浓度为0.06-0.08mM；

含待测腐败菌的菌悬液的制备方法如下：挑取分离纯化后的待测腐败菌单菌落于胰蛋白胨大豆肉汤中，30℃水浴摇瓶培养至肉汤菌落总数达9.0-10.0log CFU/mL，并用无菌生理盐水调整菌悬液浓度至8.0-9.0log CFU/mL；

所述游离氨浓度的检测采用靛酚蓝法；

所述腐败菌对待测氨基酸的脱氨能力采用下式计算：

DMA＝(T×V)×(C_评价-C_对照-C_空白)/(M×TVC×t)；

式中：

DMA为腐败菌氨基酸的脱氨能力，μmol/h；

T为检测游离氨浓度时的稀释倍数；

V为检测游离氨浓度时反应体系的总体积；

M为游离氨的分子量，g/mol；

TVC为菌悬液的菌落总数，log CFU/mL；

t为反应时间，h。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述游离氨浓度的检测具体包括以下步骤：

S1、采用0.005M的硫酸溶液将培养后的反应液稀释10-50倍；

S2、取步骤S1中稀释后的反应液2mL与含5wt％水杨酸和5wt％柠檬酸钠的混合溶液100μL、1wt％的亚硝基铁氰化钠溶液20μL及0.05M的NaClO溶液20μL混合均匀，避光反应1h；

S3、取步骤S2中避光反应后的反应液200μL于96孔板中，在695nm波长下测吸光度；

S4、利用游离氨标准溶液浓度和靛酚蓝法测得的各浓度标准溶液在695nm波长下的吸光度建立标准曲线，根据标准曲线求得待测溶液中相应游离氨的浓度C；

吸光度-浓度标准曲线形式为：Y＝aC+b，要求R²0.995，式中：C为游离氨浓度，单位μg/mL，Y为695nm波长下的吸光度。

3.权利要求1或2所述的检测方法在鱼肉腐败菌氨基酸脱氨能力检测中的应用。