[发明专利]一种血液样本质量评估方法

说明书

本发明提供了如SEQ ID NO:1‑4所示的多肽分子，及荧光标记的多肽，并提供了它们的应用。本发明还提供了评估血液样品质量的方法，以血液样品中的蛋白酶活性作为评价血液样品的质量参数，以上述多肽分子或荧光标记的多肽作为蛋白酶底物，检测蛋白酶的活性。本发明有助于提高在科学研究、临床医学、生物样本库等领域中应用的血液样本的质量，避免由于样本质量下降导致的实验室或临床医疗数据错误。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种多肽分子及其荧光标记物。本发明还涉及通过所述多肽分子评估血液样品质量的方法，所述方法包括向样品中添加荧光标记多肽和荧光淬灭剂、通过检测荧光在一定时间内的连续变化获得样品中天然蛋白酶活性的技术，也包括通过该技术测定血液样品中蛋白酶活性的值、比较测定值与标准新鲜血液样品参照值的差异、评估被测血液样品的质量。

背景技术

血浆和血清样品是临床信息的重要来源。来自血液样本的分子指标和生物标志物被广泛用于非侵入性疾病诊断、早期筛查、预后监控、健康体检等医学领域。但是，血液是高度动态性的样本。如果不能妥善的操作，在采集、存储、运输等“分析前”阶段，血样中的成分就有可能发生显著变化，为后续科学研究和临床应用带来难以预料的误差。目前，对血液样品的标准操作流程(standard operation procedure,SOP)已经形成一些普遍共识，如：减少离体后全血放置时间、尽量避免血样暴露于室温、减少血液的非冷冻保存期、长期存储的血样需要冷冻在-80℃冰箱或液氮环境、尽量保持血液存储温度恒定、避免反复冻融血样等等。在“分析前”阶段，充分执行这些SOP，能有效的减少由于样本自身变质导致的分析结果误差。

但是，当一名分析人员拿到不同渠道来源的样品时，往往很难知道这些样品在之前的流程中是否有效的遵循了SOP，也很难知道结果中的差异是来自患者的生理状态、还是来自分析前样品变质导致的。因此，如果找到一些血液中的指标，能够在不同的“分析前”操作条件下发生显著性改变，同时，又不受一般的生理状态的影响，就能够通过这些指标来探知未知血样在“分析前”阶段是否有效的遵循了SOP，明确被保存或传递的血液样品的质量是否满足临床应用或科学研究的标准，并在复杂的正式分析和数据处理之前来剔除低质量样品。

根据目前血液样本采集和存储的标准SOP，我们可以发现，正确的“分析前”操作的关键是“血液样本处理和存储的时间和温度”。因此，血液中那些依赖时间或温度而发生持续性变化的分子或参数，就有可能作为评估“分析前”操作和样品质量的指标。目前，已有一些实验室方法可用来评估血液样品由于“分析前”操作导致的质量变化，这些方法大多根据样本中某种特定组成分子的含量变化情况来评估样品的分析前操作和质量优劣，常见的目标分子包括样品中的特定蛋白质、多肽、代谢小分子、DNA或RNA。但是，这些已建立的方法目前仍处于小规模验证或实验室使用阶段，并未在医院、生物样本库等一线机构进行推广或应用。几个关键性的因素影响了上述方法的大规模应用：第一，对上述血液中指标分子的定量分析往往需求昂贵复杂的大型仪器设备，如蛋白质和多肽的分析多用MALDI-TOF质谱仪或液相色谱-ESI质谱联用仪；代谢小分子分析主要采用核磁共振、液相色谱-质谱联用或气相色谱-质谱联用；DNA和RNA的定量研究则要求具备荧光定量PCR等设备。这些仪器不仅价格昂贵，并且操作复杂，往往需要专业的维护与运行管理人员。许多大规模应用临床样本的一线机构往往并不具备这样的条件。第二，上述方法所测试的分子指标均为血液样品中的内源分子，其含量不可避免受到样品捐赠者生理状态的影响。疾病、生理和心理状态的波动、甚至饮食习惯都有可能显著影响这些血液分子的水平。因此，要广泛应用这些潜在的分子指标来评估样品的质量，必须使用不同来源和不同状态的样本对被发现的指标进行深入的验证。这进一步提高了样本质量标志物应用的门槛。第三，用来监控样本质量的分子指标需要具有比较适中的稳定性，这样才能通过其在一段时间内的稳定持续变化来获知其暴露温度与时间的信息；从这个角度看，小分子代谢物和DNA往往过于稳定，受温度影响较小；而RNA又过于敏感，短时间内就会降解。因此，如能发展一种简便易行、可靠性高的血液样本质量评估方法，将有利于血液标准化操作流程和质量控制标准在临床机构的推广，对血液样本在临床和科研机构的规范使用、提升相关临床数据的准确性与可靠性具有重要意义。