[发明专利]一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法

权利要求书

1.一种鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力的检测方法，其特征在于，包括：用磷酸盐缓冲液溶解待测氨基酸底物配制得到待测氨基酸的底物溶液，将含待测腐败菌的菌悬液加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为评价组，将含待测腐败菌的菌悬液加入到磷酸盐缓冲液中作为对照组，将无菌生理盐水加入到所述待测氨基酸的底物溶液中作为空白组，分别在相同条件下培养并提取评价组、对照组和空白组的生物胺，检测得到生物胺浓度C_评价、C_对照和C_空白，计算得到腐败菌对待测氨基酸的脱羧能力；

所述生物胺浓度的检测采用HPLC法；

所述培养的温度为30-35℃；

所述培养的时间为48-60h；

所述待测氨基酸的底物溶液的配制具体包括，用0.045M、pH7.50的磷酸盐缓冲液溶解得到10.0-15.0mM的待测氨基酸的底物溶液，121℃灭菌15-20min，冷却后再加入二硫苏糖醇和磷酸吡哆醛，并控制二硫苏糖醇和磷酸吡哆醛的终浓度分别为0.5mM和0.05-0.1mM；

所述含待测腐败菌的菌悬液的配制具体包括，挑取分离纯化后的待测腐败菌单菌落于胰蛋白胨大豆肉汤中，30℃水浴摇瓶培养至肉汤菌落总数达9.0-10.0log CFU/mL，并用无菌生理盐水调整菌悬液浓度至8.0-9.0log CFU/mL；

所述腐败菌对待测氨基酸的脱羧能力采用下式计算：

DCA＝(T×V)×(C_评价-C_对照-C_空白)/(M×TVC×t)；

式中：

DCA为腐败菌氨基酸的脱羧能力，μmol/h；

T为提取生物胺时的稀释倍数；

V为检测生物胺时反应体系的总体积；

M为生物胺的分子量，g/mol；

TVC为菌悬液的菌落总数，log CFU/mL；

t为反应时间，h；

所述腐败菌为Pseudomonas helmanticensis或Shewanella putrefaciens。

2.权利要求1所述的检测方法在鱼肉腐败菌氨基酸脱羧能力检测中的应用。