[发明专利]一种后睾科吸虫核糖体内转录间隔区的通用引物及设计和扩增方法在审
| 申请号： | 201911051617.5 | 申请日： | 2019-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN110747277A | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 高俊峰;邱阳元;马晓晓;果馨如;常巧呈;王春仁 | 申请（专利权）人： | 黑龙江八一农垦大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;G16B30/10;C12N15/11;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 23208 大庆禹奥专利事务所 | 代理人： | 朱士文;杨晓梅 |
| 地址： | 163000 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通用引物 扩增 吸虫 核糖体内转录间隔区 形态特征鉴定 反向引物序 华支睾吸虫 引物特异性 准确度 正向引物 种质混杂 引物 种间 进化 | ||
1.一种后睾科吸虫核糖体内转录间隔区的通用引物，其特征在于：所述正向引物序列为：ACAATGACGGTTTCAGCGAGT(SEQ ID No.1)，反向引物序列为：CACAAACAACCCGACTCCAAGG(SEQ ID No.2)。
2.一种根据权利要求1所述的后睾科吸虫核糖体内转录间隔区的通用引物的设计和扩增方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
(1)从Genbank获取后睾科吸虫28S rDNA和18S rDNA序列，利用Clusta1X vl.83做序列的比对，分别在3’端和5’端找出保守序列，作为引物候选区；
(2)利用OLIGO v6软件对候选区序列进行分析，设定引物序列选择条件。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中引物序列选择条件为：引物长度21-24bp左右，GC含量40％-65％，退火温度为50-55℃。
4.权利要求1所述的后睾科吸虫核糖体内转录间隔区的通用引物在鉴别一种后睾科吸虫中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的鉴定过程为：提取待鉴别后睾科吸虫的基因组DNA，使用通用引物对提取的DNA进行核糖体内转录间隔区扩增反应，对扩增产物进行纯化测序。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述扩增反应体系为：取100ng模板DNA，0.5uL浓度为10umol/L的上游引物，0.5uL浓度为10umol//L的下游引物，2.5uL 10X ExTaqBuffer，2uL浓度为10mmol/L的dNTP，0.2uL ExTaq聚合酶混合，加双蒸水至25uL。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述扩增反应条件为：94℃预变性5min，然后94℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸2min，进行35个循环，最后72℃延伸7min。
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