[发明专利]一种利用啤酒糟蛋白制备抗氧化多肽的方法

权利要求书

1.一种利用啤酒糟蛋白制备抗氧化多肽的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

1)啤酒糟纤维素酶酶解：将湿啤酒糟置于干燥箱中，并在60℃条件下鼓风烘干，再经粉碎机粉碎，过80目的筛；将过筛后的啤酒糟干粉与水以料液比1：10溶解于水中，并用稀盐酸调节溶液pH值为5～6，向该溶液中加入质量分数为2.0％～2.5％的纤维素酶，在50～55℃条件下酶解4～5h，将纤维素酶酶解后的啤酒糟料液于85℃水浴灭酶15min，冷却至室温备用；

2)啤酒糟蛋白酶酶解：选取风味蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶对步骤1)中的备用物料进行酶解，将两种蛋白酶以1：1的比例进行复合，添加量均为5.0％，用氢氧化钠调节pH值至7.5～8.0，调整料液为1：11，并在50-55℃酶解4～5h，将风味蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶酶解后的啤酒糟料液于85℃水浴灭酶15min，冷却至室温备用；

3)啤酒糟蛋白的水解度测定：将步骤2)中灭酶后的啤酒糟在3000r/min条件下离心10min，并收集酶解液；啤酒糟蛋白的水解度即为蛋白质水解过程中被裂解的肽键数占原料蛋白质总肽键数的百分数，即水解度＝水解液中氨基态氮含量/原料液中总氮含量×100％，采用甲醛滴定法测定啤酒糟蛋白的氨基酸态氮含量，记为X1，即可算出水解度；

4)啤酒糟多肽产量的测定：

a)酸溶蛋白质的测定：吸取酶解液10mL，加入质量分数为15％的三氯乙酸(TCA)溶液10mL，混合均匀，静置10min；将溶液定量转移后在3000r/min下离心10min后，保留上清液，去除沉淀并计算上清液中酸溶蛋白质含量，记为X2；

b)多肽产量计算：

X＝X₂-X₁

其中：X为啤酒糟酶解液中多肽产量，单位为g/100mL；

X1为酶解液中氨基酸态氮含量，单位为g/100mL；

X2为酶解液中酸溶蛋白质含量，单位为g/100mL；

5)啤酒糟多肽的分离纯化：用截留分子量为3kDa、10kDa的超滤膜对啤酒糟水解液进行超滤，压力为2～8bar，温度为30℃，分别获得分子量小于3kDa和分子量小于10kDa的两种组份，加入活性炭1.5～2.0g/100ml，脱色15～20min，过滤活性炭，即得到抗氧化肽溶液；

6)啤酒糟中水不溶性膳食纤维的提取：将酶解后的料液进行分离，所得残渣经多次水洗干燥后即得不溶性膳食纤维。