[发明专利]大口黑鲈虹彩病毒的胶体金可视化检测方法及所用探针

权利要求书

1.大口黑鲈蛙病毒属虹彩病毒胶体金可视化检测方法所用的探针，其特征是为：

5'-CGACTATGTGCTCAACTCTTGGCTG-3'。

2.基于核酸探针的大口黑鲈蛙病毒属虹彩病毒胶体金可视化检测方法，其特征是包括以下步骤：

①大口黑鲈虹彩病毒核酸探针的设计和合成；

②胶体金的制备；

③核酸探针-胶体金复合物的孵育结合；

将20μL的探针与1mL的胶体金于37℃混合孵育24h，得AuNPs-probe；

④待测大口黑鲈中病毒DNA的提取；

⑤胶体金反应检测体系的建立以及鉴定待测鱼样是否感染大口黑鲈虹彩病毒：

反应体系为：2μL步骤④所得的DNA与53μL AuNPs-probe混合后，于37℃培养20分钟后，添加浓度为1.5M的NaCl溶液5μL；2分钟后观察混合液的颜色变化；

如混合液颜色仍为红色，则判定结果为阴性，

如混合液颜色为灰蓝色，判定该样品结果为阳性。

3.根据权利要求2所述的大口黑鲈蛙病毒属虹彩病毒胶体金可视化检测方法，其特征是：

所述步骤②为：

0.01g/100m的金氯酸溶液100mL加热至沸后，于搅拌条件下加入1g/100ml柠檬酸钠溶液3.5mL，继续加热煮沸15min后撤去热源，搅拌直至冷却至室温，得胶体金，该胶体金4℃保存。

4.根据权利要求3所述的大口黑鲈蛙病毒属虹彩病毒胶体金可视化检测方法，其特征是：所述步骤①是针对虹彩病毒主衣壳蛋白基因(MCP)序列进行特异性探针设计。

5.根据权利要求1～4所述的大口黑鲈蛙病毒属虹彩病毒胶体金可视化检测方法，其特征是所述步骤①中所用的探针为：

6.根据权利要求1～4所述的大口黑鲈蛙病毒属虹彩病毒胶体金可视化检测方法，其特征是所述步骤④为：

以待检大口黑鲈脾脏作为样品；

样品经过液氮冻融研磨后采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA//DNAExtraction KitVer.5.0试剂盒提取病毒DNA。