[发明专利]一种低毒喜树碱纳米复合物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种低毒喜树碱纳米复合物，其特征在于，所述喜树碱纳米复合物包括HBc VLPs纳米载体和包封于所述HBc VLPs纳米载体内的喜树碱和/或喜树碱衍生物。

2.根据权利要求1所述的低毒喜树碱纳米复合物，其特征在于，所述HBc VLPs纳米载体具有如下氨基酸序列：从N端到C端依次为HBc-144和NS5A多肽且所述HBc-144的主要免疫区域插设有靶向肽，所述靶向肽的两端分别通过连接肽与HBc-144相连。

3.根据权利要求2所述的低毒喜树碱纳米复合物，其特征在于，所述NS5A多肽的氨基酸序列为AGSWLRDIWDWICEVLSDFKTWLKAKAKLMPTM；所述靶向肽为RGD序列，所述连接肽的氨基酸序列为GTSGSSGSGSGGSGSGGGG；所述靶向肽和连接肽序列替代所述HBc-144的第79和80位氨基酸。

4.根据权利要求2或3所述的低毒喜树碱纳米复合物，其特征在于，所述HBc-144载体的C端还连接有6xHis标签。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的低毒喜树碱纳米复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)通过基因工程的方法制备HBc VLPs纳米颗粒；(2)使所述HBc VLPs纳米颗粒解聚成所述HBc VLPs载体；(3)使所述喜树碱和/或喜树碱衍生物包封于所述HBcVLPs载体内，即得所述低毒喜树碱纳米复合物。

6.根据权利要求5所述的低毒喜树碱纳米复合物的制备方法，其特征在于，所述HBcVLPs纳米颗粒的制备方法为：将编码所述HBc VLPs载体的核苷酸序列作为目的基因插入到质粒载体上；将所述质粒载体转化入大肠杆菌感受态细胞；挑取单菌落在LB培养基上扩大培养至OD600达到0.6-0.8；用IPTG于18℃诱导培养18h；收集并裂解菌体，纯化制备得到的HBc VLPs纳米颗粒。

7.根据权利要求5所述的低毒喜树碱纳米复合物的方法，其特征在于，使所述HBc VLPs纳米颗粒解聚成所述HBc VLPs载体的方法为：在1000r/min磁力搅拌下向步骤(1)得到的HBc VLPs纳米颗粒中加入解聚缓冲液，室温解聚2.5h即得所述HBc VLPs载体；所述解聚缓冲液由pH8.0的50mM Tris-HCl，，150nM NaCl和2.0M尿素组成。

8.根据权利要求5所述的低毒喜树碱纳米复合物的方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为：在震荡下，向步骤(2)制备得到的所述HBc VLPs载体中加入喜树碱的乙醇溶液，放置在磁力搅拌器上在4℃冰箱内30min，使充分混匀，得混合液；将所述混合液装入透析袋中并置于聚合缓冲液1中4℃透析12h；再将透析袋置于聚合缓冲液中4℃透析12h，期间每4h更换1次聚合缓冲液2；透析结束后即得所述低毒喜树碱纳米复合物，-20℃保存于稳定保存液中；所述聚合缓冲液1的成分为：50mM Tris-HCl，pH8.0，150mM NaCl，10％甘油，1％甘氨酸；所述聚合缓冲液2的成分为：50mM Tris-HCl，pH8.0，150mM NaCl和1％甘氨酸；所述稳定保存液为0.01M PBS。

9.根据权利要求1-4中任意一项所述的低毒喜树碱纳米复合物在制备肿瘤靶向药物中的应用。

10.根据权利要求1-4中任意一项所述的低毒喜树碱纳米复合物在制备治疗肺癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌或直肠癌靶向药物中的应用。