[发明专利]一种负载PRP的胰腺脱细胞支架及其制备方法

权利要求书

1.一种负载PRP的胰腺脱细胞支架，包括胰腺脱细胞支架，其特征在于所述胰腺脱细胞支架来源于大鼠，所述胰腺脱细胞支架的脉管中组装富含多种促血管化生长因子的PRP，并种植人脐静脉内皮细胞，所述PRP与人脐静脉内皮细胞在胰腺脱细胞支架内形成负载PRP的胰腺脱细胞支架。

2.根据权利要求1所述的一种负载PRP的胰腺脱细胞支架的制备方法，其特征在于所述制备方法的步骤为：

步骤1、PRP的制备：从大鼠心脏中将8ml全血收集到10ml无菌注射器中，然后放入装有3.2％柠檬酸钠作为抗凝剂的采血管中,通过变速离心机的初始离心以215g进行10min，将发白薄膜层上方的血浆置于第二个离心管中，然后再通过变速离心机以863g离心10min，弃去上清液，剩余的1ml带有血小板沉淀的部分为PRP；

步骤2、负载PRP于胰腺脱细胞支架：用DMEM培养基分别溶解2.5ml、5ml、7.5ml、10mlPRP，配置成50ml相应浓度为5％、10％、15％、20％的PRP灌注液，将稀释后的PRP运用三维动态循环灌注装置经脾动脉于37℃、1ml/min循环灌注24小时，负载PRP于胰腺脱细胞支架脉管中；

步骤3、最适PRP负载浓度的筛选：将负载不同浓度PRP的胰腺脱细胞支架修剪成直径1cm，厚度5mm的薄片组织，将这些薄片组织置于每孔含250μl基质胶的24孔培养板中，后将2×10⁴个人脐静脉内皮细胞添加到每个孔中，培养箱中孵育6小时，通过观察负载不同浓度PRP的胰腺脱细胞支架促进人脐静脉内皮细胞形成管腔能力，从而筛选出最适的PRP负载浓度值为10％。

步骤4、内皮细胞种植于胰腺脱细胞支架：将5×10⁷个人脐静脉内皮细胞，加入1ml DMEM培养基，充分混匀，经脾动脉注射进负载PRP的胰腺脱细胞支架，静置2小时，通过三维动态循环灌注装置1ml/min循环灌注3天后，将支架植入大鼠背部。